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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 骨形态发生蛋白2（BMP-2）的定位检测方法
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comi4869

铜虫 (初入文坛)

[求助] 骨形态发生蛋白2（BMP-2）的定位检测方法 已有2人参与

想在管状材料内固定BMP-2，已经买了溶液。但是固定之后如何检测BMP-2进入的深度和量呢？有没有人做过这方面？用市售的BMP-2抗体做荧光可以吗？
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1楼 2016-03-13 20:55:35
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你的管状材料是怎样的，做荧光抗体好像不能够检测进入的量吧。另，BMP-2如果没有缓释的话，一周之内会降解，从而失去活性。
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只要路是对的，就不怕路远．
2楼2016-03-16 16:41:29
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comi4869

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwb95599 at 2016-03-16 16:41:29
不知道你的管状材料是怎样的，做荧光抗体好像不能够检测进入的量吧。另，BMP-2如果没有缓释的话，一周之内会降解，从而失去活性。

那荧光抗体能检测到进入的深度吗？？材料是钛纳米管

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3楼2016-03-17 00:53:32
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comi4869

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwb95599 at 2016-03-16 16:41:29
不知道你的管状材料是怎样的，做荧光抗体好像不能够检测进入的量吧。另，BMP-2如果没有缓释的话，一周之内会降解，从而失去活性。

想看一下蛋白能不能进到管里去，能用荧光证明蛋白的位置吗

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4楼2016-03-17 00:55:08
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by comi4869 at 2016-03-17 00:53:32
那荧光抗体能检测到进入的深度吗？？材料是钛纳米管
...

具体这个我没有做过，但感觉有些难度。
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只要路是对的，就不怕路远．
5楼2016-03-17 16:42:27
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comi4869

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wwb95599 at 2016-03-17 16:42:27
具体这个我没有做过，但感觉有些难度。...

恩，谢谢
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6楼2016-03-17 19:54:43
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FDgogo

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
comi4869: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-03-31 00:04:03
BMP-2抗体可以检测BMP-2进入碳纳米管的深度，一般我们都是一抗二抗孵育后激光共聚焦显微镜观察；但是问题是你碳纳米管的口径和尺寸是多少（一般我们认为口径至少要大于7.5 nm才能顺利填装BMP-2），各纳米管间分离状态如何，而且一般confocal到600倍已经很难拍了，在该倍数下scale bar为20 μm。
目前纳米尺度下最有效的蛋白检测方法应该是TEM，但是难度较大，希望对你有帮助。
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7楼2016-03-18 16:18:38
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comi4869

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by FDgogo at 2016-03-18 16:18:38
BMP-2抗体可以检测BMP-2进入碳纳米管的深度，一般我们都是一抗二抗孵育后激光共聚焦显微镜观察；但是问题是你碳纳米管的口径和尺寸是多少（一般我们认为口径至少要大于7.5 nm才能顺利填装BMP-2），各纳米管间分离状 ...

纳米管管径80nm，大小足够。
请问你买的抗体是什么品牌的呢？如果BMP-2进到纳米管里面还能用抗体标记吗？或者说应该在载入前就标记呢？
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8楼2016-03-31 00:02:19
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FDgogo

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by comi4869 at 2016-03-31 00:02:19
纳米管管径80nm，大小足够。
请问你买的抗体是什么品牌的呢？如果BMP-2进到纳米管里面还能用抗体标记吗？或者说应该在载入前就标记呢？...

一般用作免疫荧光染色的时候我们会选择Abcam的一抗和二抗，但是还是前面提到的问题，激光共聚焦显微镜并不能排到纳米尺度的成像，就算是在600X下看到的视野应该也是成片的荧光，可能进入了纳米管道也有可能仅仅停留在表面，并不能解决你前面提出的问题
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comi4869
9楼2016-03-31 10:35:24
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comi4869

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by FDgogo at 2016-03-31 10:35:24
一般用作免疫荧光染色的时候我们会选择Abcam的一抗和二抗，但是还是前面提到的问题，激光共聚焦显微镜并不能排到纳米尺度的成像，就算是在600X下看到的视野应该也是成片的荧光，可能进入了纳米管道也有可能仅仅停留 ...

太谢谢了！不知道能否留个联系方式？邮箱也可以～～

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10楼2016-04-01 14:45:37
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