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scmyjzq

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎样把溶解蛋白质的缓冲液换成另一种蛋白缓冲液 已有1人参与

大家好,最近我在做一个小蛋白的纯化,经过阳离子交换层析后,洗脱的蛋白缓冲液是阳离子交换层析的洗脱液,下一步想过镍柱,我想把这个溶解蛋白质的缓冲液改成镍柱的结合缓冲液,但是由于蛋白分子量太小不能用超滤,这样蛋白中始终有其他盐离子,用透析吧,最终只是盐离子内外保持平衡,但又不是我要的缓冲液,那该怎么换成镍柱的结合缓冲液呢?谢谢大家的指导,感激不尽
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:30:48
试试葡聚糖凝胶过滤吧,可以筛分不同大小的蛋白,也可以脱盐换液。

其实我用镍柱就可以直接亲和我的目的蛋白了,就没想过再用凝胶过滤洗脱我的小分子蛋白,只是为了让过完阳离子柱的蛋白样品与镍柱Buffer保持一致,能够更好的挂柱,才想到换buffer,不知用凝胶过滤洗脱的话,我是不是就要镍柱的buffer,这样就换液了
4楼2016-03-12 14:44:55
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寻塔dadada

新虫 (初入文坛)

试试葡聚糖凝胶过滤吧,可以筛分不同大小的蛋白,也可以脱盐换液。

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2楼2016-03-12 00:30:48
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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用G75的分子筛试试

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3楼2016-03-12 09:30:09
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by francstone at 2016-03-12 09:30:09
用G75的分子筛试试

我还想问一下,由于我的蛋白分子量3.7KD左右,太小了,不能用超滤除盐,只能透析除盐,除盐后再冻干用镍柱buffer溶解,可以吗?但是我的蛋白以前就经过冻干了的了,想这样反复冻干对蛋白影响大吗?谢谢
5楼2016-03-12 15:09:49
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