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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样把溶解蛋白质的缓冲液换成另一种蛋白缓冲液
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎样把溶解蛋白质的缓冲液换成另一种蛋白缓冲液 已有1人参与

大家好，最近我在做一个小蛋白的纯化，经过阳离子交换层析后，洗脱的蛋白缓冲液是阳离子交换层析的洗脱液，下一步想过镍柱，我想把这个溶解蛋白质的缓冲液改成镍柱的结合缓冲液，但是由于蛋白分子量太小不能用超滤，这样蛋白中始终有其他盐离子，用透析吧，最终只是盐离子内外保持平衡，但又不是我要的缓冲液，那该怎么换成镍柱的结合缓冲液呢？谢谢大家的指导，感激不尽
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1楼 2016-03-11 20:12:50
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寻塔dadada

新虫 (初入文坛)
试试葡聚糖凝胶过滤吧，可以筛分不同大小的蛋白，也可以脱盐换液。

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scmyjzq
2楼2016-03-12 00:30:48
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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用G75的分子筛试试

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3楼2016-03-12 09:30:09
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
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2楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:30:48
试试葡聚糖凝胶过滤吧，可以筛分不同大小的蛋白，也可以脱盐换液。

其实我用镍柱就可以直接亲和我的目的蛋白了，就没想过再用凝胶过滤洗脱我的小分子蛋白，只是为了让过完阳离子柱的蛋白样品与镍柱Buffer保持一致，能够更好的挂柱，才想到换buffer，不知用凝胶过滤洗脱的话，我是不是就要镍柱的buffer,这样就换液了
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4楼2016-03-12 14:44:55
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by francstone at 2016-03-12 09:30:09
用G75的分子筛试试

我还想问一下，由于我的蛋白分子量3.7KD左右，太小了，不能用超滤除盐，只能透析除盐，除盐后再冻干用镍柱buffer溶解，可以吗？但是我的蛋白以前就经过冻干了的了，想这样反复冻干对蛋白影响大吗？谢谢
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5楼2016-03-12 15:09:49
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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by scmyjzq at 2016-03-12 15:09:49
我还想问一下，由于我的蛋白分子量3.7KD左右，太小了，不能用超滤除盐，只能透析除盐，除盐后再冻干用镍柱buffer溶解，可以吗？但是我的蛋白以前就经过冻干了的了，想这样反复冻干对蛋白影响大吗？谢谢...

这个问题需要你自己先做个预实验了，理论上是没有问题的，但是case by case，不好打保票啊

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6楼2016-03-12 20:06:55
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by francstone at 2016-03-12 20:06:55
这个问题需要你自己先做个预实验了，理论上是没有问题的，但是case by case，不好打保票啊
...

我可以用1KD超滤管脱盐吗？蛋白损失会比较多吧，噶？
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7楼2016-03-14 09:59:48
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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by scmyjzq at 2016-03-14 09:59:48
我可以用1KD超滤管脱盐吗？蛋白损失会比较多吧，噶？...

不建议，蛋白损失太多

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8楼2016-03-14 12:08:19
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scmyjzq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by francstone at 2016-03-14 12:08:19
不建议，蛋白损失太多
...

那使用1KD的透析袋脱盐可以吗？更换一下缓冲液
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9楼2016-03-14 15:06:11
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尼莫

新虫 (初入文坛)
用分子筛做下 buffer 置换吧

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10楼2016-03-20 21:57:57
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