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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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匿名

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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你的cDNA浓度太高了?我一般反转录后都会稀释10~50倍再扩增。
3楼2016-03-11 22:12:56
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普通回帖

匿名

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2楼2016-03-11 19:02:49
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森林独行者

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很可能是没有把这个基因CDS全长逆转录出来,换一家公司逆转录试剂盒试试
4楼2016-03-11 23:56:22
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sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
原因很多,只能说明你的cDNA没有问题,你看一下基因的GC含量,如果高于60%的话是会出现基因组做模板能扩出来,但是cDNA则扩不出来
很给力
5楼2016-03-12 13:04:49
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匿名

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6楼2016-03-12 20:42:50
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匿名

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7楼2016-03-12 20:44:04
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8楼2016-03-12 20:44:36
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by lxy0322 at 2016-03-12 20:42:50
我稀释20倍扩的。,,你用的什么酶呀?...

我们实验室高保真的酶有两种,pfu和Evo。我比较喜欢用Pfu,buffer 的话根据实验选用。高GC含量的选用TAKARA的GC BUFFER。
9楼2016-03-12 20:55:09
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wjj1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把从基因组扩增的序列测序分析嘛,cDNA其实是对应原序列的编码序列的外显子序列,那你就要在原基因组扩增序列中去掉内含子序列在涉及引物去扩cDNA了。
10楼2016-03-12 21:37:55
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