24小时热门版块排行榜    

查看: 1214  |  回复: 5
当前主题已经存档。

melers

[交流] 我做半定量表达时,内参和目标同时PCR,内参的亮度总是比目标条带亮很多

我做半定量表达时,内参和目标同时PCR,内参的亮度总是比目标条带亮很多,调整引物的产量,仍然不能解决,并且我只用25个循环,在平台期之前。希望大家给予帮助,谢谢了!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

可以减少模板用量,或者稀释模板;目标模板的量不变
2楼2008-10-15 12:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long76

新虫 (初入文坛)

循环数不能变
3楼2008-10-15 15:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melers

我是在同一个管子里一起P。一个管子同时加两对引物。后来降低了模板的量也不能成功,别人说两对引物有竞争,问了别人,人说用两个管子,所有的都相同,就是引物不同。最后把样品点到一起跑胶。

我觉得要是在一个体系里会更好
4楼2008-10-15 23:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米见方ggsddu

金虫 (小有名气)

only屋里哇啦

两者确实有竞争,可以在一起做。如果目的条带够短,25循环可以。至于亮度问题,把内参的浓度降低,与目的产物的引物比为1/2左右,应该会好些。
低调潜行
5楼2008-10-20 21:38:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chge

金虫 (小有名气)

最好的解决的方法是:换内参!

可用于定量和半定量的内参有很多,有一些内参的含量较高,如b-actin等,
有一些则较低,如HPRT等。可以试一试一些在细胞中表达量低的内参。
详细的资料可以参考Qiagen的定量PCR的说明书。
6楼2008-10-20 22:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melers 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 01:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见