应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我做半定量表达时，内参和目标同时PCR，内参的亮度总是比目标条带亮很多
61/1返回列表
查看: 1093  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

melers

[交流] 我做半定量表达时，内参和目标同时PCR，内参的亮度总是比目标条带亮很多

我做半定量表达时，内参和目标同时PCR，内参的亮度总是比目标条带亮很多，调整引物的产量，仍然不能解决，并且我只用25个循环，在平台期之前。希望大家给予帮助，谢谢了！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-10-15 12:00:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbcaaa888

铁虫 (小有名气)
可以减少模板用量，或者稀释模板；目标模板的量不变
赞一下 回复此楼
2楼2008-10-15 12:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long76

新虫 (初入文坛)
循环数不能变
回复此楼
3楼2008-10-15 15:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melers

我是在同一个管子里一起P。一个管子同时加两对引物。后来降低了模板的量也不能成功，别人说两对引物有竞争，问了别人，人说用两个管子，所有的都相同，就是引物不同。最后把样品点到一起跑胶。

我觉得要是在一个体系里会更好
赞一下 回复此楼
4楼2008-10-15 23:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米见方ggsddu

金虫 (小有名气)

only屋里哇啦
两者确实有竞争，可以在一起做。如果目的条带够短，25循环可以。至于亮度问题，把内参的浓度降低，与目的产物的引物比为1/2左右，应该会好些。
赞一下 回复此楼
低调潜行
5楼2008-10-20 21:38:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chge

金虫 (小有名气)
最好的解决的方法是：换内参！

可用于定量和半定量的内参有很多，有一些内参的含量较高，如b-actin等，
有一些则较低，如HPRT等。可以试一试一些在细胞中表达量低的内参。
详细的资料可以参考Qiagen的定量PCR的说明书。
赞一下 回复此楼
6楼2008-10-20 22:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melers 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 4/200 2026-03-16 20:13 by Wangjingyue
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭