应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教利用PCR产物做模板跑pcr，条带变化的问题
61/1返回列表
查看: 1287  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一张七块的

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教利用PCR产物做模板跑pcr，条带变化的问题 已有1人参与

新手一枚，用cDNA做了PCR,35个循环，有目标条带，杂带不多
然后把PCR产物稀释了100倍做模板，其他体系，退火温度等都一样，跑出来的目标条带反而更暗了，还出了一条比目标条带还亮的杂带
目标条带800度BP，杂带400多BP
两次均是35个循环
求问这是怎么回事。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-09 10:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一张七块的: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-03-11 17:35:30
稀释1000倍以上吧。100倍浓度有点高。
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-09 11:57:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一张七块的

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-09 11:57:26
稀释1000倍以上吧。100倍浓度有点高。

昨晚做了梯度，稀释了10,100,1000,10000倍做模板，全都是200bp左右的杂带，而且浓度越低的越亮，没有目标条带。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-10 08:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)
既然第一次pcr有结果，可以直接连t载体了测序看看

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-10 08:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MaxInTheWind

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一张七块的 at 2016-03-10 08:46:33
昨晚做了梯度，稀释了10,100,1000,10000倍做模板，全都是200bp左右的杂带，而且浓度越低的越亮，没有目标条带。。。。...

以前能做出来现在不行了，猜一下是不是polymerase失效了？再用cDNA试一次看看
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-10 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2016-03-11 19:05:09
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 一张七块的 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭