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本人目前正在克隆2个基因 以下为我设计的引物参数 长度大概均为1000bp左右。。 我自己用TAKARA的GXL酶 和生工的聚合酶 均不能成功克隆！ 求大神指导！小弟感激不尽  发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2016-03-08 23:12:12
ok_hu
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做不出实验的时候建议加对照。1. 找能扩增出片段的引物和模板，pcr，验证酶和pcr仪是否正常。排除酶和设备问题后，用正常的酶，自己的模板，其他能扩增的引物，如内参基因，验证模板是否正常。一切正常之后，可以跑梯度pcr，也可以跑touchdown。如果实在扩不出来，就要分析模板和引物了。因为模板有高级结构，如gc含量高，是比较难扩的；其次，如果模板是cdna，有可能表达量低，那就要找高表达的时期，或者诱导其高表达。还有引物是否正确 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-08 23:32:08
4楼2016-03-09 11:09:27
ok_hu
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