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amberhwk

新虫 (小有名气)

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[求助] 质粒提取酶切已有2人参与

提完质粒可以直接酶切吗，还是说一定要胶回收以后再酶切

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1楼2016-03-08 20:29:37

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ken19860823

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amberhwk: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-09 16:20:41

引用回帖:

6楼: Originally posted by amberhwk at 2016-03-09 13:30:14
载体质粒，要和片段连接
...

这是很常规的实验啊，质粒是试剂盒提取的么？试剂盒提取质粒后，测量浓度然后用1ug进行双酶切或者分步酶切，切自己需要的带然后胶回收后溶于30ul水。跑胶确认自己回收的片段没问题（1ul就够了），一般会看到对应的单带，载体有时候会发生会连出现类似质粒的带，没有对应大小的单带。这个属于正常，连接片段的时候65度处理2min就可以（记住是加连接酶之前混合片段热处理）。质粒图谱一般是三条带，最亮的是超螺旋结构，其次是开环，最大的是线性化的载体。一般来说质粒质量越好，超螺旋越量，其他带很暗。质粒提取试剂盒提取的质粒是很纯的了，切胶回收一般处理有杂带或者含目的条带的DNA混合物。