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质粒提取酶切 已有2人参与
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提完质粒可以直接酶切吗，还是说一定要胶回收以后再酶切 发自小木虫IOS客户端 |
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ken19860823
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
amberhwk: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-09 16:20:41
amberhwk: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-09 16:20:41
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这是很常规的实验啊，质粒是试剂盒提取的么？试剂盒提取质粒后，测量浓度然后用1ug进行双酶切或者分步酶切，切自己需要的带然后胶回收后溶于30ul水。跑胶确认自己回收的片段没问题（1ul就够了），一般会看到对应的单带，载体有时候会发生会连出现类似质粒的带，没有对应大小的单带。这个属于正常，连接片段的时候65度处理2min就可以（记住是加连接酶之前混合片段热处理）。质粒图谱一般是三条带，最亮的是超螺旋结构，其次是开环，最大的是线性化的载体。一般来说质粒质量越好，超螺旋越量，其他带很暗。质粒提取试剂盒提取的质粒是很纯的了，切胶回收一般处理有杂带或者含目的条带的DNA混合物。 |
7楼2016-03-09 13:53:09
2楼2016-03-08 20:43:24
Bioexperixgs
新虫 (正式写手)
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3楼2016-03-08 23:02:26
匿名
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4楼2016-03-08 23:59:35
10