应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助！如何把两个4K的片段连起来啊？
71/1返回列表
查看: 2065  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vanessa_324

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助！如何把两个4K的片段连起来啊？ 已有6人参与

我现在在构建一种病毒的重组质粒，由于长度太长，需要分段扩增再拼接起来。
现在已获得两个4K的片段，想咨询一下，有没有同门之前拼接过这么长的片段啊？是用什么方法呢？
两个片段：第一个片段，5‘端有一个KPNI位点，3’端有SalI 位点；第二个片段，5‘有SalI位点，3’有NhelI位点
想过直接用酶连接，可是应该效率很低
想过用overlap pcr，但是长度好像受限制
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-08 16:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分别连到质粒上去，再试着切一个片段下来，连到另外一个载体上去。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-08 16:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Overlap PCR绝对没有问题，只要中间重叠序列设计合理。
再就是酶很重要，一定要选择高保真、高扩增效率的酶。比如PrimerStar Max，phusion等等。
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-08 16:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏蛋9966

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩8k还好吧，我扩增过10.8k的，用的gxl酶  也扩增过6k片段很容易啊  注意模板浓度
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-09 15:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

易水寒明

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
\现在市场上有卖这种长片段的专用的连接酶的！你去NEB搜一下
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-10 08:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Holly_yang

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 苏蛋9966 at 2016-03-09 15:10:29
扩8k还好吧，我扩增过10.8k的，用的gxl酶  也扩增过6k片段很容易啊  注意模板浓度

模板浓度应该多大比较合适呢？是摩尔浓度吗？
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-12 15:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zss莫问

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 苏蛋9966 at 2016-03-09 15:10:29
扩8k还好吧，我扩增过10.8k的，用的gxl酶  也扩增过6k片段很容易啊  注意模板浓度

可以把你的实验步骤分享一下吗？最近在拼接基因，老是拼不上啊，

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-09-20 15:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vanessa_324 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +8 angus9576 2026-08-25 8/400 2026-08-25 16:13 by mike1816
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 +5 ziyangfang 2026-08-25 7/350 2026-08-25 16:00 by alanbrown
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 18/900 2026-08-25 14:50 by Weed114114
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭