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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做qRT-PCR的RNA样品反转录之前需要稀释到相同浓度吗？why？
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fengyuran

新虫 (正式写手)

[求助] 做qRT-PCR的RNA样品反转录之前需要稀释到相同浓度吗？why？ 已有3人参与

如题目，谢谢啦！

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1楼 2016-03-08 13:32:50
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-03-09 11:11:50
如果rna浓度相差很大的话，有的甚至只需要零点几微升，有的需要几微升...

预跑的时候是能够从定量分析的图上看出来模板量的。跑完再稀释。如果就得浪费钱，可以用普通pcr扩增一下内参，跑电泳从胶上可以看出模板量的差异，然后稀释模板做qPCR

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12楼2016-03-09 16:47:17
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要，模板一样的时候反转录效率才是最相近的，反转后的cDNA量一样的时候做PCR才能更好的用起峰时间来表示模板基因的含量。
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2楼2016-03-08 14:41:28
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youyou德华

金虫 (小有名气)
最好是在你的反转录体系中就调整，保证总量一致，结果会很好。

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3楼2016-03-08 16:06:00
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要，通常使用试剂盒进行反转录时需要调整RNA的总量一致，这样反转录效率一致，得到的cDNA的量才相近，不然你就得一遍一遍的标模板，使cDNA量一致。
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fengyuran
4楼2016-03-08 16:27:02
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