| 查看: 5635 | 回复: 13 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者狂飙杰将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
酶制剂酶活测定中酶液稀释倍数、浓度相关问题（如何稀释酶液样液到指定酶活力范围）已有4人参与
|
||
|
一、 QB/T 1803-1993《工业酶制剂通用方法》 α-淀粉酶活力：lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在60,pH值为6.0 的条件下,1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g（u/mL）表示。 A1.5.1 待测酶液的制备 称取酶粉 1-2g,精确至0. 0002g(或吸取液体酶 1. 00m L)，先用少量的磷酸缓冲液(Al. 3. 4)溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中，沉渣部分再加人少量缓冲液，如此捣研 3-4次.最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度(将估计酶活力除以4,即酶活力应在 3. 7~5. 6u/mL范围内)，摇匀。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。 问题：怎么估计酶活力和稀释酶液至 3. 7~5. 6u/mL范围？ 二、GB/T 23535-2009《脂肪酶制剂》 脂肪酶活力：以脂肪酶活力单位表示，lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在一定温度和pH值条件下，l min水解底物产生lμmol的可滴定的脂肪酸，即为一个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。 6.2.4.1 待测酶液的制备 ——称取样品1-2g,精确至0. 0002g，用磷酸缓冲液(6.2.3.5)溶解并稀释。如果是粉末，可加少量缓冲液研磨再稀释。 ——测定时控制酶浓度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL-2mL。 问题：测定时控制酶浓度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL-2mL？ 三、GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》 蛋白酶活力：以蛋白酶活力单位表示，lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在一定温度和pH值条件下，l min水解酪素产生lμg酪氨酸为一个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。 B.4.2.1 待测酶液的制备 称取酶样品1g-2g,精确至0. 0002g，用相应的缓冲液溶解并稀释到一定浓度，推荐浓度范围为酶活力10u/mL~15u/mL。 对于液体样品，可以用相应的缓冲液充分溶解，然后取滤纸（慢速定性滤纸）稀释至适当浓度。 问题：如何控制酶浓度范围为酶活力10u/mL~15u/mL？？ 四、NYT 912-2004《饲料添加剂纤维素酶活力测定分光光度法》 纤维素酶活力单位：在37,pH值为5.5 的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml 的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位（U）。 8 试样溶液的制备 固体样品应粉碎或充分碾碎，然后过60目筛（孔径为0.25mm），按照附录A中建议的称样量称取试样两份，精确至0.001g。加入40ml乙酸－乙酸钠缓冲溶液（5.4）。磁力搅拌30min，再用缓冲溶液（5.4）定容至100ml，在4℃条件下避光保存24h。摇匀，取出30~50ml，上离心机离心3min。吸取5mL上清液，再用缓冲溶液（5.4）做二次稀释（稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml 之间）。 液体试样可直接用乙酸－乙酸钠缓冲溶液（5.4）进行稀释、定容（稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml之间)。如果稀释后酶液的pH值偏离5.5，需要用乙酸溶液（5.2）或乙酸钠溶液（5.3）调节至5.5，然后再用缓冲溶液（5.4）做适当稀释定容。 问题：怎么稀释让稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml 之间？ 五、QB 2583-2003《纤维素酶制剂》 羧甲基纤维素酶活力：1g固体酶（或1ml液体酶）在（50±0.1）℃、指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤维素酶pH6.0),1h水解羟甲基纤维素钠底物，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活力单位，以u/g（或u/ml）表示。简写为CMCA-DNS。 B.4.2.1 待测酶液的制备 称取固体酶样1g,精确至0.1mg（或吸取液体酶样1.0mL，精确至0.01mL），用水溶解，准确稀释定容（使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.33~0.35范围内），混匀放置10min，待测。 问题：试样液和空白液是什么？怎么稀释定容使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.33~0.35范围内？ 六、GB 8726-2006《食品添加剂 糖化酶制剂》 6.2.3.1 待测酶液的制备 糖化酶活力单位：1g固体酶粉（或1ml液体酶），于40℃、pH值为4.6的条件下，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个酶活力单位，符号为u/g（u/ml）表示。 液体酶：使用连续多挡分配器准确吸取适量酶样，移人容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度，充分摇匀，待测。 固体酶：用50mL小烧杯准确称取适量酶样，精确至1mg，用少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液（6.2.1.1）溶解，并用玻璃棒仔细捣研，将上层清液小心倾入适当的容量瓶中，在沉渣中再加入少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液（6.2.1.1），如此反复捣研3~4次，取上清液，最后全部移入容量瓶中，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容（6.2.1.1），磁力搅拌30min以充分混匀，取上清液测定。 注：制备待测酶液时，样液浓度应控制在滴定空白和样品时消耗0.05mol/L，硫代硫酸钠标准滴定溶液（6.2.1.2）的差值在4.5~ 5.5mL范围内（酶活力约为120 U/mL ~150U/mL）。 问题：怎么控制样品浓度到指定范围？ 问题看起来很多，其实都是关于酶液稀释定容方面的问题。小弟刚接触这个行业，有点不清楚的地方，希望大家不吝赐教。没有金币了，小小意思，不能敬意，请见谅。 |
回复此楼» 猜你喜欢
统计一下：硕士毕业答辩后的谢师宴是学生出钱，还是老师出钱？
已经有16人回复
-
化学口B0109(高分子合成)，拿青年基金一般需要怎样的文章水平？
已经有23人回复
-
化学B02口青基 代表作都是什么水平的？向大佬求助
已经有14人回复
-
为什么美国要封锁华为而不封锁丘C同呢？
已经有7人回复
-
选择
已经有10人回复
-
讨论贴：好本子一定会被打招呼的淘汰吗
已经有51人回复
-
九部门发文：不得将专利授权数量作为人才评价、项目评审、职称评定、高校评价等的条件
已经有21人回复
-
选期刊
已经有4人回复
-
编辑对文章提的意见
已经有3人回复
-
没收到邮件
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重量法蒸汽吸附仪在制药行业中的应用
已经有3人回复
- 工业发酵中微生物菌种的培养基选择和配制的原则
已经有14人回复
- 2015书籍超级帖一〇〇一《 酶与酶工程及其应用（高清版）》2015书籍提前发布
已经有520人回复
- 包涵体纯化和复性总结
已经有33人回复
- 土壤（地表物质层）
已经有3人回复
- 转：用创新承载梦想--扬子江药业致力新品名品开发研制巡礼
已经有15人回复
- 生物制品稳定性研究相关问题的考虑
已经有1人回复
- 铜皂法侧酶活力
已经有4人回复
- 关于中性蛋白酶检测用福林法中出现的问题
已经有5人回复
- 生物化学酶活力相关计算求助。。。。。。。
已经有1人回复
- 纯度百分百
已经有24人回复
- 对硝基苯酚法测脂肪酶活力
已经有2人回复
- 挖掘新基因资源的方法概述
已经有5人回复
- 中草药生物技术-唐克轩
已经有133人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 不同类别的蛋白酶的活力测定
已经有12人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 常用麻醉药物与应用指导原则
已经有6人回复
- 2011年博士点基金联合资助课题立项公布
已经有3人回复
- 国家食品药品监督管理局发布《2010年药品注册审批年度报告》
已经有13人回复
- SFDA2010年药品注册审批年度报告
已经有9人回复
- 转：婴幼儿发生腹泻种种原因分析
已经有4人回复
- 【原创】2010药典与2005版药典三部药典修改以及新增
已经有6人回复
- 【原创】2010与2005班药典不同以及新增内容一部二部
已经有6人回复
zhuhaoyong30649
木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1841.1
- 散金: 246
- 红花: 1
- 帖子: 1802
- 在线: 111.8小时
- 虫号: 460555
- 注册: 2007-11-16
- 专业: 水产生物营养与饲料学
3楼2016-06-16 20:58:25
4楼2016-07-23 17:29:14
6楼2017-03-02 11:58:24
8楼2017-12-04 12:52:18
__tangtang__ 
新虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 62.4
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 153
- 在线: 49.4小时
- 虫号: 3688057
- 注册: 2015-02-13
- 性别: MM
- 专业: 药物分析
10楼2018-04-23 13:17:05
【答案】应助回帖
|
一、 QB/T 1803-1993《工业酶制剂通用方法》 α-淀粉酶活力：lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在60,pH值为6.0 的条件下,1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g（u/mL）表示。 A1.5.1 待测酶液的制备 称取酶粉 1-2g,精确至0. 0002g(或吸取液体酶 1. 00m L)，先用少量的磷酸缓冲液(Al. 3. 4)溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中，沉渣部分再加人少量缓冲液，如此捣研 3-4次.最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度(将估计酶活力除以4,即酶活力应在 3. 7~5. 6u/mL范围内)，摇匀。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。 问题：怎么估计酶活力和稀释酶液至 3. 7~5. 6u/mL范围？ -----答：关键还在于稀释倍数，应该有对应的稀释表，还是参看相应的国标。 二、GB/T 23535-2009《脂肪酶制剂》 脂肪酶活力：以脂肪酶活力单位表示，lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在一定温度和pH值条件下，l min水解底物产生lμmol的可滴定的脂肪酸，即为一个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。 6.2.4.1 待测酶液的制备 ——称取样品1-2g,精确至0. 0002g，用磷酸缓冲液(6.2.3.5)溶解并稀释。如果是粉末，可加少量缓冲液研磨再稀释。 ——测定时控制酶浓度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL-2mL。 问题：测定时控制酶浓度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL-2mL？ ----和上面一样，要控制碱量之差的范围，关键还在于根据酶活来稀释，应该有相应的稀释表，脂肪酶的GB缺少这一项，再次修订国标后会加上这项。 三、GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》 蛋白酶活力：以蛋白酶活力单位表示，lg 固体酶粉(或1mL液体酶)，在一定温度和pH值条件下，l min水解酪素产生lμg酪氨酸为一个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。 B.4.2.1 待测酶液的制备 称取酶样品1g-2g,精确至0. 0002g，用相应的缓冲液溶解并稀释到一定浓度，推荐浓度范围为酶活力10u/mL~15u/mL。 对于液体样品，可以用相应的缓冲液充分溶解，然后取滤纸（慢速定性滤纸）稀释至适当浓度。 问题：如何控制酶浓度范围为酶活力10u/mL~15u/mL？？ -----------和上面的问题一样，有大致酶活对应稀释表就直观多了。 四、NYT 912-2004《饲料添加剂纤维素酶活力测定分光光度法》 纤维素酶活力单位：在37,pH值为5.5 的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml 的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位（U）。 8 试样溶液的制备 固体样品应粉碎或充分碾碎，然后过60目筛（孔径为0.25mm），按照附录A中建议的称样量称取试样两份，精确至0.001g。加入40ml乙酸－乙酸钠缓冲溶液（5.4）。磁力搅拌30min，再用缓冲溶液（5.4）定容至100ml，在4℃条件下避光保存24h。摇匀，取出30~50ml，上离心机离心3min。吸取5mL上清液，再用缓冲溶液（5.4）做二次稀释（稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml 之间）。 液体试样可直接用乙酸－乙酸钠缓冲溶液（5.4）进行稀释、定容（稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml之间)。如果稀释后酶液的pH值偏离5.5，需要用乙酸溶液（5.2）或乙酸钠溶液（5.3）调节至5.5，然后再用缓冲溶液（5.4）做适当稀释定容。 问题：怎么稀释让稀释后的待测酶液中纤维素酶的活力最好能控制在0.04~0.08U/ml 之间？ ----同样的问题。 五、QB 2583-2003《纤维素酶制剂》 羧甲基纤维素酶活力：1g固体酶（或1ml液体酶）在（50±0.1）℃、指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤维素酶pH6.0),1h水解羟甲基纤维素钠底物，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活力单位，以u/g（或u/ml）表示。简写为CMCA-DNS。 B.4.2.1 待测酶液的制备 称取固体酶样1g,精确至0.1mg（或吸取液体酶样1.0mL，精确至0.01mL），用水溶解，准确稀释定容（使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.33~0.35范围内），混匀放置10min，待测。 问题：试样液和空白液是什么？怎么稀释定容使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.33~0.35范围内？ ----空白液是先加终止剂，试样液是反应完毕再加终止液，控制这个范围关键还在于酶活的稀释上，应该有一个对应的稀释表。 六、GB 8726-2006《食品添加剂 糖化酶制剂》 6.2.3.1 待测酶液的制备 糖化酶活力单位：1g固体酶粉（或1ml液体酶），于40℃、pH值为4.6的条件下，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个酶活力单位，符号为u/g（u/ml）表示。 液体酶：使用连续多挡分配器准确吸取适量酶样，移人容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度，充分摇匀，待测。 固体酶：用50mL小烧杯准确称取适量酶样，精确至1mg，用少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液（6.2.1.1）溶解，并用玻璃棒仔细捣研，将上层清液小心倾入适当的容量瓶中，在沉渣中再加入少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液（6.2.1.1），如此反复捣研3~4次，取上清液，最后全部移入容量瓶中，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容（6.2.1.1），磁力搅拌30min以充分混匀，取上清液测定。 注：制备待测酶液时，样液浓度应控制在滴定空白和样品时消耗0.05mol/L，硫代硫酸钠标准滴定溶液（6.2.1.2）的差值在4.5~ 5.5mL范围内（酶活力约为120 U/mL ~150U/mL）。 问题：怎么控制样品浓度到指定范围？ ----都是同样的问题，还在于对酶活的合适稀释。 |
12楼2018-04-24 14:12:20
13楼2019-01-30 09:48:49
|
顶一下 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-09 16:33:35
5楼2017-02-11 22:10:07
__tangtang__
新虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 62.4
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 153
- 在线: 49.4小时
- 虫号: 3688057
- 注册: 2015-02-13
- 性别: MM
- 专业: 药物分析
7楼2017-05-04 10:58:27
可以提供一下指导么9楼2018-04-12 09:01:31
5