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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 怎么能将目的条带变亮？
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夜色霓虹

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么能将目的条带变亮？ 已有4人参与

如图最左边的是我想要变亮的！

怎么能将目的条带变亮？


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1楼 2016-03-07 15:22:17
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amberhwk

新虫 (小有名气)
这是浓度为问题吧

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2楼2016-03-07 15:28:22
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夜色霓虹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by amberhwk at 2016-03-07 15:28:22
这是浓度为问题吧

所以我把已经扩增好的做模板再扩增就得到右边的两个。这是什么原因呢？刚接触，求指导！

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3楼2016-03-07 15:30:57
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板质量合格且浓度符合酶的要求。引物设计质量高，无二聚体，两端互补配对碱基尽可能少。退火温度要优化，嫌麻烦可以用touch-down程序。
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4楼2016-03-07 20:48:07
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wangji1973

新虫 (初入文坛)
调节光圈，对比度，是可以调亮的，marker可以少加

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5楼2016-03-07 21:00:22
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jianguochen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜色霓虹 at 2016-03-07 15:30:57
所以我把已经扩增好的做模板再扩增就得到右边的两个。这是什么原因呢？刚接触，求指导！
...

你把PCR产物作为模板扩增，自然扩增效率会高很多，但看起来依然不太理想，最下面的条带是引物二聚体的话，那二聚体有点多，检查引物设计是否有问题，或者减少引物使用量，还有就是你使用的模板DNA质量如何。
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6楼2016-03-08 09:21:52
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小骆驼321

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以考虑调节一下退火温度看一看，因为看到你有引物二聚体；也可以将PCR产物吸取1ul作为模板，进行扩增看一看结果；当然了，不嫌麻烦，将目标条带割胶回收，T载体连接一下，也是一种途径了，希望能有所帮助，祝你成功
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自助者天助
7楼2016-03-08 10:24:19
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个酶，现在市场上有很多高保真，效率高的酶。
全式金，生工国产里面还可以的，选择中高端的就可以了。这两家我都用过很多
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有你真好
8楼2016-03-08 10:44:24
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sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用imagJ可以调整，此外用PCR做模板切不可加太多模板。50微升体系加20ng足够了。多了效果不好
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很给力
9楼2016-03-08 10:58:29
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