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夜色霓虹

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么能将目的条带变亮? 已有4人参与

如图最左边的是我想要变亮的!

怎么能将目的条带变亮?


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amberhwk

新虫 (小有名气)

2楼2016-03-07 15:28:22
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夜色霓虹

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by amberhwk at 2016-03-07 15:28:22
这是浓度为问题吧

所以我把已经扩增好的做模板再扩增就得到右边的两个。这是什么原因呢?刚接触,求指导!

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3楼2016-03-07 15:30:57
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板质量合格且浓度符合酶的要求。引物设计质量高,无二聚体,两端互补配对碱基尽可能少。退火温度要优化,嫌麻烦可以用touch-down程序。
4楼2016-03-07 20:48:07
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wangji1973

新虫 (初入文坛)

调节光圈,对比度,是可以调亮的,marker可以少加

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5楼2016-03-07 21:00:22
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jianguochen

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜色霓虹 at 2016-03-07 15:30:57
所以我把已经扩增好的做模板再扩增就得到右边的两个。这是什么原因呢?刚接触,求指导!
...

你把PCR产物作为模板扩增,自然扩增效率会高很多,但看起来依然不太理想,最下面的条带是引物二聚体的话,那二聚体有点多,检查引物设计是否有问题,或者减少引物使用量,还有就是你使用的模板DNA质量如何。
6楼2016-03-08 09:21:52
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小骆驼321

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以考虑调节一下退火温度看一看,因为看到你有引物二聚体;也可以将PCR产物吸取1ul作为模板,进行扩增看一看结果;当然了,不嫌麻烦,将目标条带割胶回收,T载体连接一下,也是一种途径了,希望能有所帮助,祝你成功
自助者天助
7楼2016-03-08 10:24:19
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换个酶,现在市场上有很多高保真,效率高的酶。
全式金,生工国产里面还可以的,选择中高端的就可以了。这两家我都用过很多
有你真好
8楼2016-03-08 10:44:24
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sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用imagJ可以调整,此外用PCR做模板切不可加太多模板。50微升体系加20ng足够了。多了效果不好
很给力
9楼2016-03-08 10:58:29
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