应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 菜鸟求助
81/1返回列表
查看: 1073  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuweilin

银虫 (初入文坛)

[求助] 菜鸟求助 已有1人参与

最近实验室刚做WB，昆虫High five细胞导入重组PIZT/V5-HIS-目的片段  质粒48h后裂解做WB,  5%伊利脱脂奶粉TBST稀释封闭液封闭，1:1000~2000一抗兔抗  封闭液稀释  过夜4度 ， TBST 洗三次。G&R HRP二抗 封闭液稀释，孵育1h。TBST洗3三次  ，ECL发光试剂盒处理曝光，图片如下，请问为何出现那么多非特异性条带，而特异性条带却没有？问题出在哪？求助？

菜鸟求助
IMG_20160108_120536.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
居安思危
1楼 2016-03-07 14:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kop9831

金虫 (小有名气)
封闭的时候封闭液就不要加吐温了，你封闭时间多少？孵抗体时最好在自封袋里密闭缓慢混悬孵育，没出现特异带你看看是不是一抗浓度太低了，二抗浓度却太高了？
赞一下(1人) 回复此楼
比较擅长做图，尤其是SCI投稿用的，常用工具：PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
2楼2016-03-07 16:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-07 16:35:31
封闭的时候封闭液就不要加吐温了，你封闭时间多少？孵抗体时最好在自封袋里密闭缓慢混悬孵育，没出现特异带你看看是不是一抗浓度太低了，二抗浓度却太高了？

封闭一个小时，抗体是在自封袋，网上买的相片过胶膜那种剪裁用封口机封口   会对抗体有影响不，一抗试过1:1000甚至大于1：1000
赞一下 回复此楼
居安思危
3楼2016-03-07 16:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kop9831

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuweilin at 2016-03-07 16:55:43
封闭一个小时，抗体是在自封袋，网上买的相片过胶膜那种剪裁用封口机封口   会对抗体有影响不，一抗试过1:1000甚至大于1：1000...

你曝光时加发光液会看到很强的荧光吗？如果有设备，试试用曝光的机器曝光
赞一下(1人) 回复此楼
比较擅长做图，尤其是SCI投稿用的，常用工具：PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
4楼2016-03-07 17:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-07 17:09:18
你曝光时加发光液会看到很强的荧光吗？如果有设备，试试用曝光的机器曝光...

可以看到很强荧光，压一下就如图片一样，我们这没有曝光机
赞一下 回复此楼
居安思危
5楼2016-03-07 17:13:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面那个粗的条带不是特异性条带吗？把一抗浓度降低就行了
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-07 21:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 314300420 at 2016-03-07 21:45:03
下面那个粗的条带不是特异性条带吗？把一抗浓度降低就行了

不是特异性条带，我每道的蛋白大小都不一样，第一道是GFP的，最底下那条亮带分子量在15-20KDA这样
赞一下 回复此楼
居安思危
7楼2016-03-08 08:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)
那就涉及到一抗是否识别抗原，抗原是否有表达的问题了，可以换一个标签抗体检测下，如果还是没有目的条带，应该就是抗原没有表达的问题了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-08 20:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuweilin 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:31 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭