应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 菜鸟求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 982  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuweilin

银虫 (初入文坛)

[求助] 菜鸟求助 已有1人参与

最近实验室刚做WB，昆虫High five细胞导入重组PIZT/V5-HIS-目的片段  质粒48h后裂解做WB,  5%伊利脱脂奶粉TBST稀释封闭液封闭，1:1000~2000一抗兔抗  封闭液稀释  过夜4度 ， TBST 洗三次。G&R HRP二抗 封闭液稀释，孵育1h。TBST洗3三次  ，ECL发光试剂盒处理曝光，图片如下，请问为何出现那么多非特异性条带，而特异性条带却没有？问题出在哪？求助？

菜鸟求助
IMG_20160108_120536.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
居安思危
1楼 2016-03-07 14:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kop9831

金虫 (小有名气)
封闭的时候封闭液就不要加吐温了，你封闭时间多少？孵抗体时最好在自封袋里密闭缓慢混悬孵育，没出现特异带你看看是不是一抗浓度太低了，二抗浓度却太高了？
赞一下(1人) 回复此楼
比较擅长做图，尤其是SCI投稿用的，常用工具：PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
2楼2016-03-07 16:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-07 16:35:31
封闭的时候封闭液就不要加吐温了，你封闭时间多少？孵抗体时最好在自封袋里密闭缓慢混悬孵育，没出现特异带你看看是不是一抗浓度太低了，二抗浓度却太高了？

封闭一个小时，抗体是在自封袋，网上买的相片过胶膜那种剪裁用封口机封口   会对抗体有影响不，一抗试过1:1000甚至大于1：1000
赞一下 回复此楼
居安思危
3楼2016-03-07 16:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kop9831

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuweilin at 2016-03-07 16:55:43
封闭一个小时，抗体是在自封袋，网上买的相片过胶膜那种剪裁用封口机封口   会对抗体有影响不，一抗试过1:1000甚至大于1：1000...

你曝光时加发光液会看到很强的荧光吗？如果有设备，试试用曝光的机器曝光
赞一下(1人) 回复此楼
比较擅长做图，尤其是SCI投稿用的，常用工具：PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
4楼2016-03-07 17:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-07 17:09:18
你曝光时加发光液会看到很强的荧光吗？如果有设备，试试用曝光的机器曝光...

可以看到很强荧光，压一下就如图片一样，我们这没有曝光机
赞一下 回复此楼
居安思危
5楼2016-03-07 17:13:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面那个粗的条带不是特异性条带吗？把一抗浓度降低就行了
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-07 21:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuweilin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 314300420 at 2016-03-07 21:45:03
下面那个粗的条带不是特异性条带吗？把一抗浓度降低就行了

不是特异性条带，我每道的蛋白大小都不一样，第一道是GFP的，最底下那条亮带分子量在15-20KDA这样
赞一下 回复此楼
居安思危
7楼2016-03-08 08:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)
那就涉及到一抗是否识别抗原，抗原是否有表达的问题了，可以换一个标签抗体检测下，如果还是没有目的条带，应该就是抗原没有表达的问题了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-08 20:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuweilin 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +10 77chaselx 2026-03-20 10/500 2026-03-27 11:28 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 305求调剂 +4 哇卢卡库 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:58 by sanrepian
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +8 y7czhao 2026-03-26 8/400 2026-03-26 19:51 by 不吃魚的貓
[考研] 学硕274求调剂 +3 Li李鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:32 by 提出方法的提出�
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭