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上官abc金虫 (正式写手)
王下七武海
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[交流]
菌液PCR有条带，质粒双酶切只有一条带，是怎么回事？急！
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RACE PCR后经过一系列步骤，到菌液PCR时有目的条带，但很浅。 然后大量摇菌并提取质粒进行双酶切，发现只有一条带，貌似这条带就是载体PMD18-T。上一次没进行双酶切就送质粒去测序，结果测序公司发回报告说送去的是空载体。这次看来也是没连上，实在不知道为何老是连不上PMD18-T，请各位大侠指点迷津，谢谢！ 我用的是宝生物的RACE和PMD18-T试剂盒，菌液PCR目的片段470bp左右，3'RACE得到的目的片段在2000bp左右。  双酶切电泳图  菌液PCR电泳图 |
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应该是假阳性，PCR体系或所用菌液中有污染，毕竟T载连这么大的片段那个效率是很低的。另外，3'RACE别没事就搞那么大片段，这有点儿扯了。这种体系中亲测还是500-1000比较靠谱，要不那个成功率太低。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-05 09:02:20
