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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)

[求助] 桂花总黄酮测定的几个问题 已有2人参与

从桂花中提取总黄酮,想测一下浓度,用的Al(NO3)3-NaNO2-NaOH显色法。但是在查找文献的过程中有几个问题一直不解。
1,用芦丁做对照品,应用何种浓度溶解?我查的文献当中有30%,60%,95%等等各种浓度的都有。应该选择哪个?
2,芦丁对照液应该配制成什么浓度?也是查到有配成0.1mg/ml,0.0788mg/ml,0.2mg/ml,
3,芦丁我买的是微量试剂只有20mg,给的说明里面说最好直接在瓶子里溶解,但如果都溶解配制成需要的浓度,那如何保存?
4,可以用酶标仪代替紫外分光光度计来做吗?前段时间实验室搬家,找不到紫外风光光度计了。。。
非常感谢!!!
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品,天然产物分离纯化


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuanniuniu: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 16:05:51
1.你说的这个浓度是甲醇的浓度还是其他什么?
2.你定量用的是标准曲线法还是外标一点法?这个对照品配制的浓度是根据你样品的吸光度来设定的,
3.对照品准确定量都是在容量瓶中进行的,不知道你那个瓶子是什么?能实现准确定量么?

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-03-04 23:20:28
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Yakushi cong

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuanniuniu: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-03-14 16:05:59
70%乙醇配制0.2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0.2 mg/mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL,摇匀,静置6 min;再加10%硝酸铝溶液0.4 mL,摇匀,静置6 min;再加4%氢氧化钠溶液4.0 mL,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置15 min,以相应试剂为空白,立即照紫外一可见分光光度法在500nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。我自己前几天刚做的,可以试一下,波长建议扫描一下,确定最佳波长
3楼2016-03-07 13:54:24
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-03-04 23:20:28
1.你说的这个浓度是甲醇的浓度还是其他什么?
2.你定量用的是标准曲线法还是外标一点法?这个对照品配制的浓度是根据你样品的吸光度来设定的,
3.对照品准确定量都是在容量瓶中进行的,不知道你那个瓶子是什么?能实 ...

非常感谢你的回答!不好意思,我的问题没有描述清楚,是这样的:
1.我用的是乙醇溶解,是指乙醇的浓度
2.定量用的标准曲线法,“样品的吸光度”是指待测黄酮的吸光度吗?那是不是应该在测定黄酮含量之前先测定其吸光度?
3.买的芦丁是一支20mg的瓶子,特别小,我是先在瓶子里溶解然后把溶解的液体倒入到容量瓶中再稀释吗?
4楼2016-03-13 16:13:40
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Yakushi cong at 2016-03-07 13:54:24
70%乙醇配制0.2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0.2 mg/mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL,摇匀,静置6 min;再加10%硝酸铝溶液0.4 ...

可以直接用酶标仪来测吗?我做的是桂花提取物,乙醇的浓度是不是应该和提取黄酮时所用乙醇浓度相同?
5楼2016-03-13 16:14:55
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品,天然产物分离纯化


引用回帖:
4楼: Originally posted by xuanniuniu at 2016-03-13 16:13:40
非常感谢你的回答!不好意思,我的问题没有描述清楚,是这样的:
1.我用的是乙醇溶解,是指乙醇的浓度
2.定量用的标准曲线法,“样品的吸光度”是指待测黄酮的吸光度吗?那是不是应该在测定黄酮含量之前先测定其 ...

1,只要能把你的对照品完全溶解,30%,60%,95%乙醇都可以
2,是的,可以在做标准曲线之前,先测下样品黄酮的吸光度,来设计你的标准曲线
3,你要准确配置,肯定要用十万分之一天平秤取啊,怎么能直接在瓶子里溶解呢!!
6楼2016-03-13 22:02:53
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-03-13 22:02:53
1,只要能把你的对照品完全溶解,30%,60%,95%乙醇都可以
2,是的,可以在做标准曲线之前,先测下样品黄酮的吸光度,来设计你的标准曲线
3,你要准确配置,肯定要用十万分之一天平秤取啊,怎么能直接在瓶子里溶 ...

因为是只有20mg的小瓶子,试剂无法取出,说明书上也建议直接在试剂瓶内溶解。这样是不准确的吗?

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7楼2016-03-14 15:58:29
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15189806118

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Yakushi cong at 2016-03-07 13:54:24
70%乙醇配制0.2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0.2 mg/mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL,摇匀,静置6 min;再加10%硝酸铝溶液0.4 ...

你好,我想问一下,我也是这样做然后扫谱,结果在510nm处没有出现峰,然后我改了浓度去扫,还是没有出峰,你有遇到这种情况吗,谢谢啦
8楼2018-03-14 16:50:19
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