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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 桂花总黄酮测定的几个问题
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)

[求助] 桂花总黄酮测定的几个问题 已有2人参与

从桂花中提取总黄酮，想测一下浓度，用的Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法。但是在查找文献的过程中有几个问题一直不解。
1，用芦丁做对照品，应用何种浓度溶解？我查的文献当中有30%，60%，95%等等各种浓度的都有。应该选择哪个？
2，芦丁对照液应该配制成什么浓度？也是查到有配成0.1mg/ml，0.0788mg/ml，0.2mg/ml，
3，芦丁我买的是微量试剂只有20mg，给的说明里面说最好直接在瓶子里溶解，但如果都溶解配制成需要的浓度，那如何保存？
4，可以用酶标仪代替紫外分光光度计来做吗？前段时间实验室搬家，找不到紫外风光光度计了。。。
非常感谢！！！
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1楼 2016-03-04 15:02:18
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuanniuniu: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 16:05:51
1.你说的这个浓度是甲醇的浓度还是其他什么？
2.你定量用的是标准曲线法还是外标一点法？这个对照品配制的浓度是根据你样品的吸光度来设定的，
3.对照品准确定量都是在容量瓶中进行的，不知道你那个瓶子是什么？能实现准确定量么？

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2楼2016-03-04 23:20:28
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Yakushi cong

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuanniuniu: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-03-14 16:05:59
70%乙醇配制0．2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0．2 mg／mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5％亚硝酸钠溶液0．4 mL，摇匀，静置6 min；再加10％硝酸铝溶液0．4 mL，摇匀，静置6 min；再加4％氢氧化钠溶液4．0 mL，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。我自己前几天刚做的，可以试一下，波长建议扫描一下，确定最佳波长
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3楼2016-03-07 13:54:24
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-03-04 23:20:28
1.你说的这个浓度是甲醇的浓度还是其他什么？
2.你定量用的是标准曲线法还是外标一点法？这个对照品配制的浓度是根据你样品的吸光度来设定的，
3.对照品准确定量都是在容量瓶中进行的，不知道你那个瓶子是什么？能实 ...

非常感谢你的回答！不好意思，我的问题没有描述清楚，是这样的：
1.我用的是乙醇溶解，是指乙醇的浓度
2.定量用的标准曲线法，“样品的吸光度”是指待测黄酮的吸光度吗？那是不是应该在测定黄酮含量之前先测定其吸光度？
3.买的芦丁是一支20mg的瓶子，特别小，我是先在瓶子里溶解然后把溶解的液体倒入到容量瓶中再稀释吗？
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4楼2016-03-13 16:13:40
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Yakushi cong at 2016-03-07 13:54:24
70%乙醇配制0．2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0．2 mg／mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5％亚硝酸钠溶液0．4 mL，摇匀，静置6 min；再加10％硝酸铝溶液0．4 ...

可以直接用酶标仪来测吗？我做的是桂花提取物，乙醇的浓度是不是应该和提取黄酮时所用乙醇浓度相同？
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5楼2016-03-13 16:14:55
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuanniuniu at 2016-03-13 16:13:40
非常感谢你的回答！不好意思，我的问题没有描述清楚，是这样的：
1.我用的是乙醇溶解，是指乙醇的浓度
2.定量用的标准曲线法，“样品的吸光度”是指待测黄酮的吸光度吗？那是不是应该在测定黄酮含量之前先测定其 ...

1，只要能把你的对照品完全溶解，30%，60%，95%乙醇都可以
2，是的，可以在做标准曲线之前，先测下样品黄酮的吸光度，来设计你的标准曲线
3，你要准确配置，肯定要用十万分之一天平秤取啊，怎么能直接在瓶子里溶解呢！！
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6楼2016-03-13 22:02:53
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xuanniuniu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-03-13 22:02:53
1，只要能把你的对照品完全溶解，30%，60%，95%乙醇都可以
2，是的，可以在做标准曲线之前，先测下样品黄酮的吸光度，来设计你的标准曲线
3，你要准确配置，肯定要用十万分之一天平秤取啊，怎么能直接在瓶子里溶 ...

因为是只有20mg的小瓶子，试剂无法取出，说明书上也建议直接在试剂瓶内溶解。这样是不准确的吗？

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7楼2016-03-14 15:58:29
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15189806118

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Yakushi cong at 2016-03-07 13:54:24
70%乙醇配制0．2 mg/ mL的芦丁标准贮备溶液。分别精密吸取0．2 mg／mL的芦丁对照液0ml 、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml置于10 mL容量瓶,分别加入5％亚硝酸钠溶液0．4 mL，摇匀，静置6 min；再加10％硝酸铝溶液0．4 ...

你好，我想问一下，我也是这样做然后扫谱，结果在510nm处没有出现峰，然后我改了浓度去扫，还是没有出峰，你有遇到这种情况吗，谢谢啦
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8楼2018-03-14 16:50:19
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