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依琪看海

新虫 (小有名气)

[求助] 电击转化 已有6人参与

感受态细胞没有抗性,重组质粒卡那抗性,提质粒DNA后,做电击专化应该涂卡那抗性的平板还是没抗性的平板?

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猛兽

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
自然是要涂布卡那抗性的平板
2楼2016-03-04 16:07:59
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jessy_zxy

金虫 (小有名气)

3楼2016-03-04 16:08:59
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wh283709524

新虫 (初入文坛)

最近刚在做 是抗性平板

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4楼2016-03-04 17:34:17
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

看看原理吧,不然你的实验很容易出错

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5楼2016-03-04 18:29:19
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有些实验设计原理一定了解,闲暇时可以看一些分子生物学和基因工程方面书,加油!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
6楼2016-03-04 18:38:07
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依琪看海

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-04 18:38:07
有些实验设计原理一定了解,闲暇时可以看一些分子生物学和基因工程方面书,加油!

谢谢忠告。我做的基因敲除验证,构建的质粒有抗性,感受态细胞是其他细胞不是大肠,没抗性,电转后涂布到抗性板?

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7楼2016-03-04 21:10:23
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 依琪看海 at 2016-03-04 21:10:23
谢谢忠告。我做的基因敲除验证,构建的质粒有抗性,感受态细胞是其他细胞不是大肠,没抗性,电转后涂布到抗性板?
...

没看太明白,敲除验证为什么要质粒转化到其他细胞呢?你是双交换筛选抗性丢失菌株?总之,还是你电转化的目的是什么呢?想要得到怎样的结果呢?如果单纯看你的描述,大部分人会理解为还是一个普通电转克隆,当然需要抗性平板来筛选阳性克隆。

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
8楼2016-03-04 21:19:59
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你质粒上是什么筛选基因,就用什么。如果 是抗性筛选就用相应的抗性平板,如果是氨基酸缺陷的就用SD缺陷培养基。后者出现在酵母中吧,楼主提问没把问题说清楚。宿主菌是什么,质粒是什么,带什么筛选基因都应该说清楚的。
9楼2016-03-07 14:13:36
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依琪看海

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-07 14:13:36
看你质粒上是什么筛选基因,就用什么。如果 是抗性筛选就用相应的抗性平板,如果是氨基酸缺陷的就用SD缺陷培养基。后者出现在酵母中吧,楼主提问没把问题说清楚。宿主菌是什么,质粒是什么,带什么筛选基因都应该说 ...

奥,谢谢

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10楼2016-03-07 14:47:44
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