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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC色谱柱内径改变应该如何调整? 已有5人参与

各位大神,最近用到HPLC,标准上的方法是使用3.0*150mm的C18柱子,流速为0.8mL/min。我想使用同样的流动相,但是实验室并没有这种规格的柱子,目前有4.6*150mm和4.6*250mm的柱子。我应该挑选哪一种柱子?流速需要发生改变吗?使用这种柱子会不会对保留时间和检测率发生影响呢?小白诚心求助,感谢感谢!
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lghzg

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果两根柱子的柱效不一样,那么转换之后峰型肯定有差异。你那根应该是3.0*150,1.8u的吧。那么就算你用4.6*250 5u的柱子,柱效也比之前那根差,而且还浪费流动相,因为流速很高
9楼2016-03-08 11:38:39
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查看全部 10 个回答

学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
标准方法的填料粒度是多少,和你们自己的柱子一样吗?
现在来看用4.6*150mm就行,流速得适当调高,保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好,再用第二个柱子。

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2楼2016-03-04 11:17:11
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.如果想达到大约的分离效果,使用长柱子,可提高流速和柱温,但要注意压力
2.如果本身方法分离度都非常好,为了节省时间,可以用短的,但是出峰会早,某些原方法能分开,短柱可能会分不开
3.这些你自己需要试

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-04 11:17:41
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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2016-03-04 11:17:11
标准方法的填料粒度是多少,和你们自己的柱子一样吗?
现在来看用4.6*150mm就行,流速得适当调高,保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好,再用第二个柱子。

谢谢应助!
填料粒度是一样的,都是5微米。另外想请问一下,用这个柱子的话,原则上检测限会不会发生很大改变。我之前用4.6*250mm的柱子尝试过,改用1.0mL/min的流速,发现检测限要比标准上所说的差很多,没办法达到标准方法的精确度,你觉得这是偶然机器的问题,还是不可避免的?如果可以避免,又该如何避免呢?
4楼2016-03-04 11:31:54
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