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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC色谱柱内径改变应该如何调整？
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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC色谱柱内径改变应该如何调整？ 已有5人参与

各位大神，最近用到HPLC，标准上的方法是使用3.0*150mm的C18柱子，流速为0.8mL/min。我想使用同样的流动相，但是实验室并没有这种规格的柱子，目前有4.6*150mm和4.6*250mm的柱子。我应该挑选哪一种柱子？流速需要发生改变吗？使用这种柱子会不会对保留时间和检测率发生影响呢？小白诚心求助，感谢感谢！
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1楼 2016-03-04 10:47:50
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 花锦姑娘 at 2016-03-04 11:31:54
谢谢应助！
填料粒度是一样的，都是5微米。另外想请问一下，用这个柱子的话，原则上检测限会不会发生很大改变。我之前用4.6*250mm的柱子尝试过，改用1.0mL/min的流速，发现检测限要比标准上所说的差很多，没 ...

这与诸多色谱参数有关，比如流动相、柱温、流速、色谱柱等等，所谓标准方法的色谱条件是在他那个柱子和特定仪器上优化得来了。实际测试条件改变以后，就会发生改变。你可以适当调节色谱参数，以得到适合你自己的色谱条件。
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5楼2016-03-04 13:17:21
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普通回帖

学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
标准方法的填料粒度是多少，和你们自己的柱子一样吗？
现在来看用4.6*150mm就行，流速得适当调高，保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好，再用第二个柱子。
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花锦姑娘
2楼2016-03-04 11:17:11
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.如果想达到大约的分离效果，使用长柱子，可提高流速和柱温，但要注意压力
2.如果本身方法分离度都非常好，为了节省时间，可以用短的，但是出峰会早，某些原方法能分开，短柱可能会分不开
3.这些你自己需要试

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3楼2016-03-04 11:17:41
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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2016-03-04 11:17:11
标准方法的填料粒度是多少，和你们自己的柱子一样吗？
现在来看用4.6*150mm就行，流速得适当调高，保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好，再用第二个柱子。

谢谢应助！
填料粒度是一样的，都是5微米。另外想请问一下，用这个柱子的话，原则上检测限会不会发生很大改变。我之前用4.6*250mm的柱子尝试过，改用1.0mL/min的流速，发现检测限要比标准上所说的差很多，没办法达到标准方法的精确度，你觉得这是偶然机器的问题，还是不可避免的？如果可以避免，又该如何避免呢？
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4楼2016-03-04 11:31:54
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
流速和柱内径的平方成正比。这必须调整，否则出峰时间和分辨率都会变化。检测限和进样量有关。如果进样量按内径平方加大，理论上检测限不应该变化。如果进样量不变，那么检测限会变差。

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6楼2016-03-04 13:28:42
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
长柱子峰较宽，容易造成检测限变差。除非你必须要长柱子的塔板数来凑分辨率，还是在短柱的基础上调整比较好。

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7楼2016-03-04 13:31:47
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RX_豆丁

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不如直接打电话问仪器公司吧
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考上研究生的都是神
8楼2016-03-07 10:39:46
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lghzg

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果两根柱子的柱效不一样，那么转换之后峰型肯定有差异。你那根应该是3.0*150,1.8u的吧。那么就算你用4.6*250 5u的柱子，柱效也比之前那根差，而且还浪费流动相，因为流速很高
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9楼2016-03-08 11:38:39
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lionguy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用4.6*250mm的柱子吧，流速为1.0-1.2mL/min；尽量使待测组分的保留时间在5分钟以后，和杂质峰分离开即可。
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10楼2016-03-08 12:06:44
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