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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC色谱柱内径改变应该如何调整? 已有5人参与

各位大神,最近用到HPLC,标准上的方法是使用3.0*150mm的C18柱子,流速为0.8mL/min。我想使用同样的流动相,但是实验室并没有这种规格的柱子,目前有4.6*150mm和4.6*250mm的柱子。我应该挑选哪一种柱子?流速需要发生改变吗?使用这种柱子会不会对保留时间和检测率发生影响呢?小白诚心求助,感谢感谢!
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 花锦姑娘 at 2016-03-04 11:31:54
谢谢应助!
填料粒度是一样的,都是5微米。另外想请问一下,用这个柱子的话,原则上检测限会不会发生很大改变。我之前用4.6*250mm的柱子尝试过,改用1.0mL/min的流速,发现检测限要比标准上所说的差很多,没 ...

这与诸多色谱参数有关,比如流动相、柱温、流速、色谱柱等等,所谓标准方法的色谱条件是在他那个柱子和特定仪器上优化得来了。实际测试条件改变以后,就会发生改变。你可以适当调节色谱参数,以得到适合你自己的色谱条件。
5楼2016-03-04 13:17:21
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普通回帖

学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
标准方法的填料粒度是多少,和你们自己的柱子一样吗?
现在来看用4.6*150mm就行,流速得适当调高,保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好,再用第二个柱子。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-03-04 11:17:11
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.如果想达到大约的分离效果,使用长柱子,可提高流速和柱温,但要注意压力
2.如果本身方法分离度都非常好,为了节省时间,可以用短的,但是出峰会早,某些原方法能分开,短柱可能会分不开
3.这些你自己需要试

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-04 11:17:41
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花锦姑娘

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2016-03-04 11:17:11
标准方法的填料粒度是多少,和你们自己的柱子一样吗?
现在来看用4.6*150mm就行,流速得适当调高,保留时间是会改变的。
如果怎么调整色谱条件都分离的不好,再用第二个柱子。

谢谢应助!
填料粒度是一样的,都是5微米。另外想请问一下,用这个柱子的话,原则上检测限会不会发生很大改变。我之前用4.6*250mm的柱子尝试过,改用1.0mL/min的流速,发现检测限要比标准上所说的差很多,没办法达到标准方法的精确度,你觉得这是偶然机器的问题,还是不可避免的?如果可以避免,又该如何避免呢?
4楼2016-03-04 11:31:54
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

流速和柱内径的平方成正比。这必须调整,否则出峰时间和分辨率都会变化。检测限和进样量有关。如果进样量按内径平方加大,理论上检测限不应该变化。如果进样量不变,那么检测限会变差。

发自小木虫Android客户端
6楼2016-03-04 13:28:42
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

长柱子峰较宽,容易造成检测限变差。除非你必须要长柱子的塔板数来凑分辨率,还是在短柱的基础上调整比较好。

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-04 13:31:47
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RX_豆丁

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不如直接打电话问仪器公司吧
考上研究生的都是神
8楼2016-03-07 10:39:46
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lghzg

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果两根柱子的柱效不一样,那么转换之后峰型肯定有差异。你那根应该是3.0*150,1.8u的吧。那么就算你用4.6*250 5u的柱子,柱效也比之前那根差,而且还浪费流动相,因为流速很高
9楼2016-03-08 11:38:39
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lionguy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用4.6*250mm的柱子吧,流速为1.0-1.2mL/min;尽量使待测组分的保留时间在5分钟以后,和杂质峰分离开即可。
10楼2016-03-08 12:06:44
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