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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么Taqman探针要靠近上游引物
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z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么Taqman探针要靠近上游引物 已有1人参与

请问下老虫子   为什么Taqman探针要靠近上游引物？
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1楼 2016-03-03 16:49:18
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+5, ★有帮助, 5 2016-03-07 10:07:31
据我的理解，靠近引物时是酶扩增以及切割活性最高的时候，此时哪怕就延伸几秒钟，探针也会被切开。从而降低了由于qPCR酶扩增不完全导致的没有切开探针的可能性。
另外这个有可能也跟收集荧光信号的设置有关，通常荧光信号收集是设置在在退火过程或延伸初期的，此时qPCR酶并没有延伸多长，将探针安排在靠近正向引物处，有利于准确的收集荧光信号。
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2楼2016-03-03 18:36:51
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-03-03 18:36:51
据我的理解，靠近引物时是酶扩增以及切割活性最高的时候，此时哪怕就延伸几秒钟，探针也会被切开。从而降低了由于qPCR酶扩增不完全导致的没有切开探针的可能性。
另外这个有可能也跟收集荧光信号的设置有关，通常荧 ...

那请问一下，我在资料里看到说Taqman探针设计时要比引物温度高10-15°，是为了比引物先一步与模版结合吗？这样的话，是不是只要保证探针比引物先一步与模版结合，其Tm值不一定要比引物Tm值高10-15°？
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3楼2016-03-07 10:09:46
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