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毕赤酵母表达原核来源的酶
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肉肉肉.
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毕赤酵母表达原核来源的酶
已有1人参与
各位大神好!我又有问题了!
我要把一个原核来源的酶在真核毕赤酵母中表达 但是这个原核来源的酶的起始密码子是TTG不是ATG,酵母是否能识别呢?我是要把TTG改为ATG呢还是说在TTG前面加一个ATG呢?还是说不变也能表达?
多谢大神啦!!救救我呀!!!
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1楼
2016-03-02 14:57:42
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肉肉肉.
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2楼
2016-03-02 15:07:14
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kaobo2012
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【答案】应助回帖
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最佳答案
2016-03-02 20:44:23
必须要改成ATG。否则酵母不识别。其实,你在什么宿主中表达,就用该宿主的偏好密码子。另外,你在酵母中表达原核生物的酶,你看看氨基酸序列中有没有糖基化位点,我的经验是,酵母表达原核蛋白后,会发生糖基化,这可能是你不需要,或者你不想要的。
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3楼
2016-03-02 19:55:18
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肉肉肉.
铁虫
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专业: 微生物学
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3楼
:
Originally posted by
kaobo2012
at 2016-03-02 19:55:18
必须要改成ATG。否则酵母不识别。其实,你在什么宿主中表达,就用该宿主的偏好密码子。另外,你在酵母中表达原核生物的酶,你看看氨基酸序列中有没有糖基化位点,我的经验是,酵母表达原核蛋白后,会发生糖基化,这 ...
谢谢大神!现在发现前面是一段信号肽,是否需要去掉信号肽再在毕赤酵母中表达呢?去掉之后再加上ATG起始子可行吗?跪谢啦!!!
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4楼
2016-03-02 20:44:16
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kaobo2012
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【答案】应助回帖
我实验室这边的经验是,要去掉原蛋白上的信号肽。如果需要信号肽的话,应该换成酵母识别的信号肽。信号肽之后接目的蛋白,是什么氨基酸序列,就用什么序列,没有必要非换成ATG。当然,具体还要看你要重组蛋白做什么,比如这个酶,如果第一个氨基酸不是M ,非要加个M,会不会影响活性,都不好说。
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5楼
2016-03-03 20:02:42
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3楼
:
Originally posted by
kaobo2012
at 2016-03-02 19:55:18
必须要改成ATG。否则酵母不识别。其实,你在什么宿主中表达,就用该宿主的偏好密码子。另外,你在酵母中表达原核生物的酶,你看看氨基酸序列中有没有糖基化位点,我的经验是,酵母表达原核蛋白后,会发生糖基化,这 ...
请问如何看有无糖基化位点呢?
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6楼
2017-11-21 22:44:14
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