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关于体外转录前DNA质粒模板的线性化
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最近在做感染性克隆相关的实验，已经构件好了DNA模版，下一步进行体外转录，之后转染细胞，有几个问题不太清楚： 1 在线性化酶切DNA模版链前，DNA模版质粒的浓度要达到多少（微克/微升）转录效果比较好？ 2 一般正常体系酶切需要多长时间可以保证质粒充分切割？ 3 很多体外转录试剂盒（mMESSAGE mMACHINE® Kit/MEGAscript® Kit）的说明书上介绍，酶切质粒之后需要加入EDTA，醋酸铵和乙醇等试剂来终止酶切，之后离心去上清浓缩质粒再用dH2O或TE buffer，请问做过相关实验的朋友在实验中是否这样处理了呢？ |
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