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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求助关于大肠高密度发酵自溶
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助关于大肠高密度发酵自溶 已有2人参与

最近在做大肠发酵，BL21DE3,表达蛋白。用半合成培养基，发酵前期采用间歇式补料，中后期稳定补料，设计周期是30h。现在遇到的问题是发酵到20h以后DO会突然快速下降，5L罐子DO下降后调慢补料后DO会重新维持稳定，菌体也没有自溶；500L罐子DO开始下降后就会快速自溶。求大神帮忙分析下原因～

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高密度发酵

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1楼 2016-03-01 14:52:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

棘白菌素

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 16:31:48
补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗？
...

一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培养，控制了菌的比生长速率，DO稳定在一个较低水平也是可以理解的；如果500L也开始一直下降，菌体量如果增加明显，说明你补料速度可能大了，如果像你说的出现自溶现象，那么建议你注意发酵液的澄清度和起泡情况，因为有可能是感染噬菌体；重复试验几次，换个设备，如果都是这样，再找找是不是有其他因素没有发现。希望能帮到你
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青春留不住，白发自然生！
6楼2016-03-01 17:26:00
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普通回帖

棘白菌素

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lfwvm8: 金币+10, ★有帮助, 谢谢回帖~ 2016-03-06 19:22:39
lfwvm8: 金币+2, ★有帮助 2016-04-18 16:48:46
还是要确保补料及时
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青春留不住，白发自然生！
2楼2016-03-01 16:12:10
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lfwvm8: 金币+10, ★有帮助, 谢谢回帖~ 2016-03-06 19:23:15
lfwvm8: 金币+5, ★有帮助 2016-04-18 16:49:16
PH值有变化时开始补料，用补料的方法来控PH。
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希望大家多多交流。
3楼2016-03-01 16:28:05
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 16:12:10
还是要确保补料及时

补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗？

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4楼2016-03-01 16:31:48
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2016-03-01 16:28:05
PH值有变化时开始补料，用补料的方法来控PH。

氨水自动调节pH，补料稳定后pH基本没波动～是停止补料，停止加氨水后，pH上升后再补料吗？

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5楼2016-03-01 16:34:29
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 17:26:00
一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培 ...

这个是一次5L发酵DO变化图
求助关于大肠高密度发酵自溶



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7楼2016-03-01 17:50:41
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 17:26:00
一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培 ...

自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？

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8楼2016-03-01 17:54:59
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
引用回帖:
5楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 16:34:29
氨水自动调节pH，补料稳定后pH基本没波动～是停止补料，停止加氨水后，pH上升后再补料吗？
...

PH一开始变化时不用氨水控，直接用补料的方法来控试试，我们上罐就是用的这种方法，效果还不错的。
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希望大家多多交流。
9楼2016-03-02 09:26:42
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lindench

专家顾问 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 17:54:59
自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？
...

如何排除噬菌体的污染？

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10楼2016-03-02 09:43:30
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