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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助关于大肠高密度发酵自溶 已有2人参与

最近在做大肠发酵,BL21DE3,表达蛋白。用半合成培养基,发酵前期采用间歇式补料,中后期稳定补料,设计周期是30h。现在遇到的问题是发酵到20h以后DO会突然快速下降,5L罐子DO下降后调慢补料后DO会重新维持稳定,菌体也没有自溶;500L罐子DO开始下降后就会快速自溶。求大神帮忙分析下原因~

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高密度发酵

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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 16:31:48
补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗?
...

一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后,会出现DO上升的情况,这个时候补料诱导,DO会下降至一定水平后稳定;而你的实验是一直在补料,碳源保持充足,DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期,调慢补料后进入饥饿培养,控制了菌的比生长速率,DO稳定在一个较低水平也是可以理解的;如果500L也开始一直下降,菌体量如果增加明显,说明你补料速度可能大了,如果像你说的出现自溶现象,那么建议你注意发酵液的澄清度和起泡情况,因为有可能是感染噬菌体;重复试验几次,换个设备,如果都是这样,再找找是不是有其他因素没有发现。希望能帮到你
青春留不住,白发自然生!
6楼2016-03-01 17:26:00
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普通回帖

棘白菌素

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lfwvm8: 金币+10, 有帮助, 谢谢回帖~ 2016-03-06 19:22:39
lfwvm8: 金币+2, 有帮助 2016-04-18 16:48:46
还是要确保补料及时
青春留不住,白发自然生!
2楼2016-03-01 16:12:10
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lfwvm8: 金币+10, 有帮助, 谢谢回帖~ 2016-03-06 19:23:15
lfwvm8: 金币+5, 有帮助 2016-04-18 16:49:16
PH值有变化时开始补料,用补料的方法来控PH。
希望大家多多交流。
3楼2016-03-01 16:28:05
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 16:12:10
还是要确保补料及时

补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗?

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4楼2016-03-01 16:31:48
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2016-03-01 16:28:05
PH值有变化时开始补料,用补料的方法来控PH。

氨水自动调节pH,补料稳定后pH基本没波动~是停止补料,停止加氨水后,pH上升后再补料吗?

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5楼2016-03-01 16:34:29
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 17:26:00
一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后,会出现DO上升的情况,这个时候补料诱导,DO会下降至一定水平后稳定;而你的实验是一直在补料,碳源保持充足,DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期,调慢补料后进入饥饿培 ...

这个是一次5L发酵DO变化图
求助关于大肠高密度发酵自溶



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7楼2016-03-01 17:50:41
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lfwvm8

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2016-03-01 17:26:00
一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后,会出现DO上升的情况,这个时候补料诱导,DO会下降至一定水平后稳定;而你的实验是一直在补料,碳源保持充足,DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期,调慢补料后进入饥饿培 ...

自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢?

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8楼2016-03-01 17:54:59
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

引用回帖:
5楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 16:34:29
氨水自动调节pH,补料稳定后pH基本没波动~是停止补料,停止加氨水后,pH上升后再补料吗?
...

PH一开始变化时不用氨水控,直接用补料的方法来控试试,我们上罐就是用的这种方法,效果还不错的。
希望大家多多交流。
9楼2016-03-02 09:26:42
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lindench

专家顾问 (文坛精英)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lfwvm8 at 2016-03-01 17:54:59
自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢?
...

如何排除噬菌体的污染?

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10楼2016-03-02 09:43:30
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