应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr产物作为模板的问题
31/1返回列表
查看: 2063  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huangdelian

银虫 (正式写手)

[求助] pcr产物作为模板的问题 已有1人参与

请问各位专家一下，我有一批微量组织样品，用免提取试剂盒提取后进行小体系pcr，然后又想扩大体系送测序，但是提取的DNA用完了，只有之前扩小体系的产物，然后用第一次pcr的产物分别稀释了10-1000倍作为模板，发现之前有条带的样品都扩不出来，我的目的片段是650bp左右，请问下这是什么原因呢？有什么方法可以解决这个问题吗？谢谢各位专家指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-02-29 21:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oliviashane

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的二次PCR体系中模板量是多少？如果加入模板过多的话，会引入大量第一次PCR的杂质，一般加1~2微升即可。
另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-01 10:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssswzf

金虫 (小有名气)
ＤＮＡ聚合酶的保真性怎么样？复制的越大出差的几率越高，没有结果也是有可能的！比较靠谱的是把你的目的ＤＮＡ克隆到载体保存！
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-22 16:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangdelian 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭