24小时热门版块排行榜    

查看: 1942  |  回复: 2

huangdelian

银虫 (正式写手)

[求助] pcr产物作为模板的问题 已有1人参与

请问各位专家一下,我有一批微量组织样品,用免提取试剂盒提取后进行小体系pcr,然后又想扩大体系送测序,但是提取的DNA用完了,只有之前扩小体系的产物,然后用第一次pcr的产物分别稀释了10-1000倍作为模板,发现之前有条带的样品都扩不出来,我的目的片段是650bp左右,请问下这是什么原因呢?有什么方法可以解决这个问题吗?谢谢各位专家指点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oliviashane

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的二次PCR体系中模板量是多少?如果加入模板过多的话,会引入大量第一次PCR的杂质,一般加1~2微升即可。
另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好。
2楼2016-03-01 10:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssswzf

金虫 (小有名气)


DNA聚合酶的保真性怎么样?复制的越大出差的几率越高,没有结果也是有可能的!比较靠谱的是把你的目的DNA克隆到载体保存!
3楼2016-04-22 16:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangdelian 的主题更新
信息提示
请填处理意见