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蓬山远音

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌OD值越摇越低 已有2人参与

用大肠杆菌表达蛋白,培养基是TB,第一次测OD值0.71,过了十分钟后再测变成了0.34,听师兄师姐们说是溶菌,这是怎么回事,请各位大神赐教!小女子感激不尽!(同批次用LB培养基摇的菌没有问题)
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原海亮

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蓬山远音: 金币+5 2016-02-29 11:04:41
应该是噬菌体污染导致菌体自溶,在进行摇瓶或中小试尝尝会出现这些问题,而且这种自溶的菌液不要随意倾倒,尽量经过热处理后专门处理。如果没有下游大批量发酵生产,那么可以简单换一个正确转化子进行诱导表达,或者重新转化。当然溶菌现象有一定随机性,和实验室环境有关,尽量避免噬菌体污染需要注意:维持实验室整洁;构建好的克隆质粒可以在90°煮半小时,再转化感受态细胞;验证正确的克隆,在进行摇瓶表达前,甘油管转接到最后摇瓶,可以不加抗性。祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-02-28 20:44:01
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
信息太少,在摇摇看看。还有测的过程中的误差,在摇摇看看,收集更多的数据在分析。祝顺利

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2016-02-29 10:39:34
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蓬山远音

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-02-28 20:44:01
应该是噬菌体污染导致菌体自溶,在进行摇瓶或中小试尝尝会出现这些问题,而且这种自溶的菌液不要随意倾倒,尽量经过热处理后专门处理。如果没有下游大批量发酵生产,那么可以简单换一个正确转化子进行诱导表达,或者 ...

谢谢,
4楼2016-02-29 11:05:18
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-字仲康

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2016-03-01 19:08:15
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蓬山远音

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-02-29 10:39:34
信息太少,在摇摇看看。还有测的过程中的误差,在摇摇看看,收集更多的数据在分析。祝顺利

谢谢建议!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2016-03-01 22:47:17
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蓬山远音

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-01 19:08:15
嗯嗯,是的,在摇摇看看,溶菌的话可以在培养基中看得见有絮状物的

谢谢!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-03-01 22:47:44
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蓬山远音

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 蓬山远音 at 2016-03-01 22:47:44
谢谢!
...

请问您知道原因是什么吗?还有怎么避免?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2016-03-01 23:12:11
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
估计噬菌体污染,再摇会看见絮状物,尽量这几天先不做实验,或者更换有噬菌体抗性的感受态,实验室及摇床可用甲醇熏蒸来杀死噬菌体。
9楼2016-03-03 19:49:39
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