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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 大肠杆菌OD值越摇越低
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蓬山远音

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌OD值越摇越低 已有2人参与

用大肠杆菌表达蛋白，培养基是TB，第一次测OD值0.71，过了十分钟后再测变成了0.34，听师兄师姐们说是溶菌，这是怎么回事，请各位大神赐教！小女子感激不尽！（同批次用LB培养基摇的菌没有问题）
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1楼 2016-02-28 16:27:10
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原海亮

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蓬山远音: 金币+5 2016-02-29 11:04:41
应该是噬菌体污染导致菌体自溶，在进行摇瓶或中小试尝尝会出现这些问题，而且这种自溶的菌液不要随意倾倒，尽量经过热处理后专门处理。如果没有下游大批量发酵生产，那么可以简单换一个正确转化子进行诱导表达，或者重新转化。当然溶菌现象有一定随机性，和实验室环境有关，尽量避免噬菌体污染需要注意:维持实验室整洁；构建好的克隆质粒可以在90°煮半小时，再转化感受态细胞；验证正确的克隆，在进行摇瓶表达前，甘油管转接到最后摇瓶，可以不加抗性。祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-02-28 20:44:01
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
信息太少，在摇摇看看。还有测的过程中的误差，在摇摇看看，收集更多的数据在分析。祝顺利
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

蓬山远音
3楼2016-02-29 10:39:34
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蓬山远音

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-02-28 20:44:01
应该是噬菌体污染导致菌体自溶，在进行摇瓶或中小试尝尝会出现这些问题，而且这种自溶的菌液不要随意倾倒，尽量经过热处理后专门处理。如果没有下游大批量发酵生产，那么可以简单换一个正确转化子进行诱导表达，或者 ...

谢谢，
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4楼2016-02-29 11:05:18
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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蓬山远音
5楼2016-03-01 19:08:15
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蓬山远音

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-02-29 10:39:34
信息太少，在摇摇看看。还有测的过程中的误差，在摇摇看看，收集更多的数据在分析。祝顺利

谢谢建议！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2016-03-01 22:47:17
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蓬山远音

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-01 19:08:15
嗯嗯，是的，在摇摇看看，溶菌的话可以在培养基中看得见有絮状物的

谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2016-03-01 22:47:44
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蓬山远音

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 蓬山远音 at 2016-03-01 22:47:44
谢谢！
...

请问您知道原因是什么吗？还有怎么避免？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2016-03-01 23:12:11
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计噬菌体污染，再摇会看见絮状物，尽量这几天先不做实验，或者更换有噬菌体抗性的感受态，实验室及摇床可用甲醇熏蒸来杀死噬菌体。
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9楼2016-03-03 19:49:39
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