| 查看: 498 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
在线等，关于3‘RACE，求助高手！
|
|||
|
最近在做RACE，是很简单的3'RACE,但是做了半个月了，都没有P出条带来。 很着急！ 我是用自己设计的5'-GGCCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'做反转录，然后用5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3' 与自己的特异性上游引物（1）做PCR，没有条带出现。但是我还是用这个 5'-GGCCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'引物反转录的第一链做模板，用特异性上游引物（1）与一个特异性的下游引物（2）做中间一个片段的PCR时，却是可以P出目的条带的，不知道问题出在哪里。延伸时间已经很长了，退火温度也调到最低。两个相同的反应体系，只是下游的引物不一样而已，为什么RACE就做不出呢？求达人指点一下！ 而且我用自己设计的接头接头引物反转录出来的模板，P一些特定的片段时经常是没有结果的，而用试剂盒自带的oligDT引物反转录之后，就可以P出这些特定的条带，这是不是说明我的Race引物有问题呢？应该怎么改？或者注意什么? 还有，大家在做完反转录后PCR时，是用反转录的原液来做模板，还是稀释了多少倍后再用来做模板啊？ 好像还看到有的说明书上说要将一次反转录的原液（20ul）一次性的做某一片段的PCR，而且还不用再加DNTP（因为反转录时已经加了），有人这样做过吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程
已经有5人回复
-
一志愿南师大0703化学 275求调剂
已经有3人回复
-
0703化学
已经有3人回复
-
308求调剂
已经有7人回复
-
289求调剂
已经有4人回复
-
求调剂推荐 材料 304
已经有12人回复
-
材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂
已经有11人回复
-
考研化学308分求调剂
已经有12人回复
-
085600，材料与化工321分，求调剂
已经有9人回复
-
265求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
3楼2008-10-12 16:57:27
superarm
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2000
- 散金: 18
- 帖子: 632
- 在线: 226.3小时
- 虫号: 560892
- 注册: 2008-05-20
- 性别: GG
- 专业: 水产生物遗传育种学
2楼2008-10-12 11:21:46
4楼2008-10-13 09:06:14
5楼2008-10-13 09:31:03
6