应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 在线等，关于3‘RACE，求助高手！
61/1返回列表
查看: 611  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xuheping

[交流] 在线等，关于3‘RACE，求助高手！

最近在做RACE，是很简单的3'RACE,但是做了半个月了，都没有P出条带来。 很着急！
   
    我是用自己设计的5'-GGCCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'做反转录，然后用5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3' 与自己的特异性上游引物（1）做PCR，没有条带出现。但是我还是用这个
5'-GGCCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'引物反转录的第一链做模板，用特异性上游引物（1）与一个特异性的下游引物（2）做中间一个片段的PCR时，却是可以P出目的条带的，不知道问题出在哪里。延伸时间已经很长了，退火温度也调到最低。两个相同的反应体系，只是下游的引物不一样而已，为什么RACE就做不出呢？求达人指点一下！
   
   而且我用自己设计的接头接头引物反转录出来的模板，P一些特定的片段时经常是没有结果的，而用试剂盒自带的oligDT引物反转录之后，就可以P出这些特定的条带，这是不是说明我的Race引物有问题呢？应该怎么改？或者注意什么?

  还有，大家在做完反转录后PCR时，是用反转录的原液来做模板，还是稀释了多少倍后再用来做模板啊？
好像还看到有的说明书上说要将一次反转录的原液（20ul）一次性的做某一片段的PCR，而且还不用再加DNTP（因为反转录时已经加了），有人这样做过吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-10-11 21:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superarm

金虫 (正式写手)
再设计一个特异性引物，做个巢式PCR.
赞一下 回复此楼
与分子生物学的同仁一起遨游科学的海洋！
2楼2008-10-12 11:21:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taishuai2004

我也没有仔细琢磨
你在考虑一下  
是不是应该是GGCCACGCGTCGACTAGTAC的反向互补序列
而且反转录的引物在合时 你应该告诉公司做RNAase处理
赞一下 回复此楼
3楼2008-10-12 16:57:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuheping

做巢式的话是针对RACE的特异性不好来说的吧？即有多条条带时，为了提高特异性才来做的，而我这个是没有条带！

我觉得楼上的一点倒是提醒了我，也许这个引物需要提醒公司做RNA酶消化处理。那个接头引物不用反的。
赞一下 回复此楼
4楼2008-10-13 09:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuheping

刚问了，居然说国内的引物没有RNA FREE这种处理的技术！还是不知道原因在哪里
赞一下 回复此楼
5楼2008-10-13 09:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superarm

金虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-26 17:04
引物好像没有必要RNA FREE处理，我都用生工的引物，基因丰度低的有必要二次扩增。最好巢式，我的经验之谈 。
赞一下(6人) 回复此楼
与分子生物学的同仁一起遨游科学的海洋！
6楼2008-10-14 17:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuheping 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:38 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:15 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭