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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳条带拖尾和出现杂带
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prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 电泳条带拖尾和出现杂带 已有3人参与

PCR后进行跑胶检测，发现跑完胶之后，在紫外照射之前，拿到的胶为下面的那种情况，肉眼看到的后面两个图中，其中浅蓝色的为目的条带，但是两位的那些深蓝色的是什么啊，是非特异条带吗？
还有，在紫外照射图片中，目的条带跑成那样，能进行胶回收吗？

电泳条带拖尾和出现杂带
P60226-091039-001.jpg.JPG


电泳条带拖尾和出现杂带-1
P60226-091313.jpg.JPG


电泳条带拖尾和出现杂带-2
P60226-091345.jpg.JPG
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1楼 2016-02-26 09:33:14
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那个蓝色只是loading dye吧，大部分电泳时都要往样品里加的
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2楼2016-02-26 09:46:11
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xiangyingliu

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以的胶回收了，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解

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3楼2016-02-26 09:48:19
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xiangyingliu

银虫 (小有名气)
肉眼是看不见条带的，那两条蓝色的是指示大概位置的

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4楼2016-02-26 09:49:13
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oliviashane

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
浅蓝色的条带不是你的目的基因的条带。
那是核酸电泳常用的指示剂，溴酚蓝(Bromophenol Blue, Bb)，呈蓝紫色；二甲苯青(Xylene Cyannol,Xc)，呈蓝色。
溴酚蓝的分子量为670道尔顿，在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍, 溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同,而二甲苯青在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同.
二甲苯青的分子量为554.6道尔顿，携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中泳动率比溴酚蓝慢。
与指示剂迁移相当的DNA大小与凝胶浓度的关系
琼脂糖凝胶(%) 二甲苯青(bp) 溴酚蓝(bp)
2.0                  4000              300
1.5                  2000              250
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5楼2016-02-26 10:30:21
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiangyingliu at 2016-02-26 09:48:19
可以的胶回收了，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指 ...

谢谢
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6楼2016-03-01 08:21:33
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by oliviashane at 2016-02-26 10:30:21
浅蓝色的条带不是你的目的基因的条带。
那是核酸电泳常用的指示剂，溴酚蓝(Bromophenol Blue, Bb)，呈蓝紫色；二甲苯青(Xylene Cyannol,Xc)，呈蓝色。
溴酚蓝的分子量为670道尔顿，在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二 ...

感谢
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7楼2016-03-01 08:22:19
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