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prthefu木虫 (著名写手)
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[交流]
电泳条带拖尾和出现杂带 已有3人参与
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PCR后进行跑胶检测，发现跑完胶之后，在紫外照射之前，拿到的胶为下面的那种情况，肉眼看到的后面两个图中，其中浅蓝色的为目的条带，但是两位的那些深蓝色的是什么啊，是非特异条带吗？ 还有，在紫外照射图片中，目的条带跑成那样，能进行胶回收吗？  P60226-091039-001.jpg.JPG  P60226-091313.jpg.JPG  P60226-091345.jpg.JPG |
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oliviashane
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浅蓝色的条带不是你的目的基因的条带。 那是核酸电泳常用的指示剂，溴酚蓝(Bromophenol Blue, Bb)，呈蓝紫色；二甲苯青(Xylene Cyannol,Xc)，呈蓝色。 溴酚蓝的分子量为670道尔顿，在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍, 溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同,而二甲苯青在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同. 二甲苯青的分子量为554.6道尔顿，携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中泳动率比溴酚蓝慢。 与指示剂迁移相当的DNA大小与凝胶浓度的关系 琼脂糖凝胶(%) 二甲苯青(bp) 溴酚蓝(bp) 2.0 4000 300 1.5 2000 250 |
5楼2016-02-26 10:30:21
fjtony163
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米米
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2楼2016-02-26 09:46:11
xiangyingliu
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可以的胶回收了，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-02-26 09:48:19
xiangyingliu
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4楼2016-02-26 09:49:13
