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小汰宝金虫 (正式写手)
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in fusion同源臂重组时，同源臂最多可以多长？ 已有4人参与
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现在要把一段基因构建到目标载体上，并且给基因前面加上T7启动子＋lac操纵子＋RBS. 目前想到比较稳妥的办法就是把基因构建到含有T7＋lac操纵子＋RBS的质粒上(比如petdute)，然后再把一整段T7＋lac＋RBS＋基因一起P下来，再连接一次到目标载体。 但是也有个想法，不知道能不能实现:就是把基因从最初载体上P下来的时候，前端就加上T7＋lac操纵子＋RBS的同源臂，并且环P目标载体的时候也给对应的那端加上这个同源臂，实现一步连接。 如此一来，引物为了包括这段同源臂，要在结合区域20bp以外，再加上85bp同源臂，总共100多bp了，不知道这么长的引物和同源臂有没有问题？ snapgene中模拟过了，是可以的，但是实验室没人用过这么长的引物，所以求教~~ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2017-03-05 02:20:08
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3楼2017-03-05 09:36:18
我爱chi辣椒
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额，推荐看一篇文献Characterization of Stilbene Synthase Genes in Mulberry ( Morus atropurpurea ) and Metabolic Engineering for the Production of Resveratrol in Escherichia coli。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-03-05 13:17:44
burma9
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5楼2019-01-03 09:12:53