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fusheng011

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何使用水饱和酚？ 已有4人参与

大家好 请教个问题 我把我的质粒用体外转录试剂盒体外转录后 说明书上说要对转录后的RNA进行纯化 其中有一步说用酚/氯仿（1:1比例）抽提 请问大家谁用过酚/氯仿（1:1比例）这个是如何配制的呀？

另外，请教大家谁用过用过水饱和酚？我直接从生物公司买到了一瓶水饱和酚 但是看到有分层（分上下两层，下层比较多）摇荡均匀静止后马上又出现分层 我不知道用的时候是吸取上层用还是吸取下层用 麻烦指教！！
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1楼 2010-07-08 20:14:12
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
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上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀
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2楼2010-07-08 20:59:15
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fusheng011

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by evebobo at 2010-07-08 20:59:15:
上层是水  下层是酚  就是体积比   然后混匀

请问您用过水饱和酚吗？详细说下是怎么用的？用之前混匀用还是直接吸取下层的液相用呢？谢谢了！
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3楼2010-07-08 21:05:18
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上层是水  下层是酚  所以是直接吸下层就可以  
用过 提DNA的时候
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4楼2010-07-08 21:07:23
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ben1147

木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
水饱和酚上层是水，两个作用：一是水封，防止下层酚接触空气被氧化；二是保证下层的酚里水的饱和度。

酚：氯仿=1:1就是水饱和酚（RNA纯化用水饱和酚，DNA纯化用Tris饱和酚）和氯仿等体积混匀。12000rpm离心2min，弃掉上层析出的水，用下层的有机相抽提核酸溶液。
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5楼2010-07-08 21:08:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用
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6楼2010-07-08 21:09:14
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 21:09:14:
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用

都差不多  反正都是下层
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7楼2010-07-08 21:10:35
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fusheng011

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-07-08 21:08:11:
水饱和酚上层是水，两个作用：一是水封，防止下层酚接触空气被氧化；二是保证下层的酚里水的饱和度。

酚：氯仿=1:1就是水饱和酚（RNA纯化用水饱和酚，DNA纯化用Tris饱和酚）和氯仿等体积混匀。12000rpm离心2mi ...

您好 再请教一下 按照您说的 那我要做转录后RNA的纯化 按照步骤 我需要先配制1:1的酚氯仿 就是把买回的水饱和酚和氯仿等体积混合 然后高速离心后弃掉上层的水相就是1:1的酚氯仿了 然后拿着1:1的酚氯仿进行下步的操作 对吧？

如果我是提取或者纯化DNA的话 1:1的酚氯仿就要用Tris饱和酚和氯仿等体积混合然后离心 是这样的吗？谢谢
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8楼2010-07-08 21:28:34
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ben1147

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-09 08:02:03
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Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 21:09:14:
为什么是水饱和酚，不是tris饱和平衡酚吗？
tris饱和平衡酚下层才是酚，直接抽取下层用

水饱和酚是用水饱和的苯酚，苯酚羟基上的氢可以解离，因此显酸性
Tris饱和酚是用Tris缓冲液饱和的苯酚，使用的Tris缓冲液pH=8.0，碱性。

在碱性条件下，RNA的磷酸二酯键不稳定。因此纯化DNA时用Tris饱和酚，纯化RNA时用水饱和酚
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9楼2010-07-08 22:07:27
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ben1147

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fusheng011 at 2010-07-08 21:28:34:


您好 再请教一下 按照您说的 那我要做转录后RNA的纯化 按照步骤 我需要先配制1:1的酚氯仿 就是把买回的水饱和酚和氯仿等体积混合 然后高速离心后弃掉上层的水相就是1:1的酚氯仿了 然后拿着1:1的酚氯仿进行下步 ...

是这样的
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10楼2010-07-08 22:07:46
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