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关于PCR产物直接进行的平末端连接问题已有1人参与
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请问大家，kod，pfu等高保真聚合酶扩增的片段为平末端，能否直接连接到使用平末端内切酶切开的载体上？ 还有下面几个问题请教大家： 1. T4 DNA聚合酶可以连接内切酶切口3'-OH和5'-P，该5'-P为一个磷酸。而PCR扩增产物5'端有3个P，这样能不能和载体上的3'-OH连接上。 2. 我看了一些资料上平末端连接需要载体去磷酸化，并且插入片段要进行磷酸化，请问插入片段的磷酸化是不是必要的，因为磷酸化的相对成本比较高。 问题有点长，麻烦各位耐心阅读。谢谢。 |
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