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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR反应需要做标曲吗
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR反应需要做标曲吗已有2人参与

各位大虾，我想通过相对定量的方法比较一个基因在两个不同样本中的表达量差异，已经选择16s rRNA为内参基因，查阅了很多资料，现在有几个问题：
1.如果选择2−ΔΔCt法，是不是需要做标准曲线呢？
2.如果选择ΔCt法，需要做标曲吗？（我有个同学说他用的这个方法，当时没有做标曲，我有点困惑）
3.这两种方法可以任意选择吗，有没有什么限制
谢谢各位，祝大家实验顺利
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1楼2019-08-31 21:24:14
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by prthefu at 2019-09-02 08:55:45
关于扩增效率，好像是都应该知道的吧，引物扩张效率要基本一致...

怎么知道的呢
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10楼2019-09-02 09:05:32
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Cherishqj: 金币+15, ★★★很有帮助 2019-09-02 10:23:14
你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
3楼2019-09-01 12:48:03
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-09-01 12:48:03
你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。

可是不做标曲怎么判断引物是否设计地合理呢？
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4楼2019-09-01 20:12:25
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-09-01 12:48:03
你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。

而且我看到了这样一段话。。应该是要做标曲的吧
荧光定量PCR反应需要做标曲吗
360截图1624122486130110.png
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5楼2019-09-01 20:15:37
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