24小时热门版块排行榜    

查看: 1487  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Cherishqj

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR反应需要做标曲吗已有2人参与

各位大虾,我想通过相对定量的方法比较一个基因在两个不同样本中的表达量差异,已经选择16s rRNA为内参基因,查阅了很多资料,现在有几个问题:
1.如果选择2−ΔΔCt法,是不是需要做标准曲线呢?
2.如果选择ΔCt法,需要做标曲吗?(我有个同学说他用的这个方法,当时没有做标曲,我有点困惑)
3.这两种方法可以任意选择吗,有没有什么限制
谢谢各位,祝大家实验顺利
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Cherishqj: 金币+15, ★★★很有帮助 2019-09-02 10:23:14
你是要做相对定量来比较表达差异情况,双△法,不需要做标曲。整理Ct值,做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
3楼2019-09-01 12:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Cherishqj at 2019-09-01 20:15:37
而且我看到了这样一段话。。应该是要做标曲的吧

360截图1624122486130110.png
...

关于扩增效率,好像是都应该知道的吧,引物扩张效率要基本一致
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
8楼2019-09-02 08:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Cherishqj at 2019-09-01 20:12:25
可是不做标曲怎么判断引物是否设计地合理呢?...

你所谓的判断引物是否设计合理,就是看引物扩增特异性和扩张效率吧
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
9楼2019-09-02 08:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by Cherishqj at 2019-09-02 09:07:08
扩增特异性可以从熔解曲线看,扩增效率要从什么看呢...

扩增曲线
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
12楼2019-09-02 09:23:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Cherishqj 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 化学口B0109(高分子合成),拿青年基金一般需要怎样的文章水平? +14 salmon95 2024-05-30 23/1150 2024-06-02 16:37 by 款款飞
[论文投稿] 没收到邮件 10+4 荣小撇 2024-05-31 9/450 2024-06-02 13:25 by bobvan
[基金申请] 三个评委收到的基金包里面的项目是相同的吗? +4 河马の史诗 2024-06-02 4/200 2024-06-02 13:18 by dxcharlary
[硕博家园] 论大家对6070后普通教授导师的看法 +7 SNaiL1995 2024-05-28 11/550 2024-06-02 13:16 by 小虫子咔咔
[考博] 求25博导,金属增材制造方向 +3 22机械 2024-06-01 3/150 2024-06-02 11:17 by Napoleonsky
[基金申请] 2024杰青和万人领军什么时候会评 +3 墨香琴韵 2024-06-02 3/150 2024-06-02 10:31 by 摩天思瑞
[基金申请] 离职后国自然项目不能变更单位,在新单位还能申请新的国自然项目吗 5+3 宜兰 2024-05-31 9/450 2024-06-02 09:42 by Xiaolin81
[硕博家园] 每到中夜,情难自抑 +34 sioc-sunj 2024-05-28 58/2900 2024-06-02 02:53 by csyky2007
[硕博家园] 实验室太吵闹,无法安静学习,怎么办? +7 utahh 2024-05-31 12/600 2024-06-02 01:23 by dking22
[教师之家] 研究生在毕业答辩时挂了,遗憾 +10 spacr2022 2024-05-27 13/650 2024-06-01 17:45 by keyaner23
[考博] 24年博士招生 +8 abinit432 2024-05-27 10/500 2024-06-01 17:38 by czp97
[基金申请] B口人才项目 +9 WOWO159357 2024-05-29 19/950 2024-06-01 14:24 by linxuhuizj
[论文投稿] 求Sci期刊推荐 10+4 甄小鱼 2024-05-30 7/350 2024-06-01 10:41 by bobvan
[基金申请] 数理的人才答辩通知发了吗 +7 yzy3327 2024-05-30 7/350 2024-06-01 09:15 by 撒哈拉西部
[硕博家园] 求问endnote上Wiley引用格式在哪下载 +3 Elon. 2024-05-30 3/150 2024-05-31 10:13 by crazy peng
[有机交流] 液相纯度高,但产品析不太出来 10+4 cui19236 2024-05-27 9/450 2024-05-30 07:45 by yuanjijoy
[基金申请] 信息学部函评结束了吗? +6 ducan21 2024-05-28 7/350 2024-05-29 12:10 by WORLD0256
[基金申请] 如果您是国自然评审专家 +3 丁香园账户 2024-05-28 3/150 2024-05-29 06:44 by gaohui8888
[有机交流] 奇怪的物质 100+4 桃桃PXS 2024-05-27 7/350 2024-05-28 10:22 by 091602
[基金申请] 面上基金会评专家,有回避机制吗? +4 huang1991js 2024-05-27 4/200 2024-05-27 19:08 by 星火12
信息提示
请填处理意见