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[交流]
敲除基因同源重组问题
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| 本人最近在做酵母基因敲除和表达。都是采用同源重组的方法，敲除的方法是同源臂-启动子-抗性基因CDS-终止子-下游同源臂。但是同源臂和启动子、终止子序列都是从基因组上PCR扩增的，采用电转化的方法将DNA片段转入酵母中，会不会启动子和终止子区域就与酵母基因组上的同源序列发生重组了呢？包括在酵母中进行基因的表达，也是采用rDNA当同源臂，rDNA-启动子-表达基因-终止子-rDNA，理想状况下是rDNA序列发生同源重组，将rDNA-启动子-表达基因-终止子-rDNA重组到rDNA区域，但是会不会启动子和终止子也重组到基因组上，这样就降低阳性概率呢？ |
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