24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 4096  |  回复: 10
【悬赏金币】回答本帖问题,作者墨迹太深将赠送您 200 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

墨迹太深

木虫 (正式写手)

[求助] 小于100bp的DNA双酶切已有3人参与

我现在有一个已经合成了包含目的片段的质粒,要把目的片段从质粒(2802bp)上双酶切下来,酶切后跑胶看不到89bp的目的片段,但是能够看出来质粒已经没被线性化了,求分子生物学大神指导~
下面的图,泳道1是marker,泳道2是没有酶切的质粒,泳道3,4是双酶切后的质粒,看不到目的片段条带

小于100bp的DNA双酶切
2018-5-13.jpg@biostar2009@飞约疯人院@youlinglyw
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:58:07
本帖仅楼主可见
5楼2018-05-14 17:50:09
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 11 个回答

用户晓晓

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:57:34
两个判断:
1,楼主应该标注清楚maker的大小,最下面的maker条带也已经不清晰了,说明跑胶时间比较长了。建议调整胶浓度2%-3%,跑胶时间不要太长,因为98bp的短条带跑的比较快,多观察几次,应该能观察到短条带的。

2,如果实在看不到短条带的存在,建议设置引物对目的片段进行PCR扩增测序来验证质粒是否包含正确的酶切位点和目的序列。

有问题欢迎讨论!

祝试验顺利!
2楼2018-05-14 16:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨迹太深

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2018-05-14 16:30:23
两个判断:
1,楼主应该标注清楚maker的大小,最下面的maker条带也已经不清晰了,说明跑胶时间比较长了。建议调整胶浓度2%-3%,跑胶时间不要太长,因为98bp的短条带跑的比较快,多观察几次,应该能观察到短条带的。 ...

你好,谢谢你的回复。

1.图片我已经修改了,关于marker,最下面一条是100bp,最上面三条是3000bp,2000bp,1500bp。

2.有一个问题想请教一下,我现在这样跑的时间,marker都还没跑开,如果再缩短时间,那marker岂不是跑不开了。

3.我不知道怎么给你金币唉,等我研究研究

谢谢层主

我是生物小白,望不吝赐教
小于100bp的DNA双酶切-1
2018-5-13.jpg

3楼2018-05-14 17:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

用户晓晓

木虫 (正式写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:57:50
质粒比较大,你的目的前段又比较小,maker只要能判断大小即可。目前主要是为了能确定你的98bp的存在,所以建议设置2%的胶,100电压,跑个20到30分钟,中间多看看,同时可以再点一个maker I(100-600bp)。

发自小木虫Android客户端
4楼2018-05-14 17:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 如何分离原料与产品 5+4 qwerasdf587 2024-04-24 13/650 2024-04-26 23:18 by 119966984
[考博] 真的好想读博! +15 wangzhe_bs 2024-04-22 22/1100 2024-04-26 22:11 by 小木雄子
[考研] 没学上 +6 季向阳 2024-04-26 12/600 2024-04-26 21:06 by 季向阳
[考研] 学硕专硕 +5 小蜗牛* 2024-04-26 5/250 2024-04-26 16:43 by 鱼翔浅底1
[考研] 0854-0855调剂 +8 shangannum1 2024-04-21 12/600 2024-04-26 16:42 by yz仔
[考博] 申博求助 +4 dskabdh 2024-04-24 11/550 2024-04-26 15:54 by dskabdh
[论文投稿] Chemical Engineering Journal投稿3周了,一直显示With editor状态。这是送审了吗? 10+4 yifeng11 2024-04-20 13/650 2024-04-26 09:48 by yifeng11
[教师之家] 刚博士毕业,入职普通一本高校 +19 保持肌肤 2024-04-20 20/1000 2024-04-26 09:16 by zhaojp918
[考博] 取博导收留 5+4 zzb777888 2024-04-20 10/500 2024-04-26 08:52 by polymerfriend
[论文投稿] Nature一直在编辑手里,考虑好几天了,是悬了吗 +12 彩虹初见 2024-04-24 12/600 2024-04-25 19:21 by 雪径踏青
[教师之家] 期末给学生划重点都是什么话术啊 +16 luokereng 2024-04-20 18/900 2024-04-25 15:46 by BusyGer
[考博] 求博导 +6 好okjh 2024-04-21 10/500 2024-04-25 14:04 by 好okjh
[硕博家园] 聊天 +11 暮色恋伊人 2024-04-22 12/600 2024-04-25 13:53 by UCTS
[基金申请] 国社科项目,你们学校都限额申报吗? +7 屡战屡败 2024-04-21 10/500 2024-04-25 12:10 by 屡战屡败
[电化学] 耗材发问 +4 Happy C 2024-04-22 4/200 2024-04-25 11:03 by 普通小虫
[考博] 博士招生 +4 zx179 2024-04-24 7/350 2024-04-24 15:01 by H考研成功
[论文投稿] 期刊推荐 20+4 木颜尘ip 2024-04-22 7/350 2024-04-24 10:06 by bobvan
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[高分子] 请问UV灯是365nm的,那么选光引发剂的波长选多少的?要完全一致吗? +4 engledd2004 2024-04-21 4/200 2024-04-22 16:08 by wangcz23
[硕博家园] 材料工程,二本硕士,值得读吗 +3 简风23 2024-04-20 6/300 2024-04-21 12:19 by 简风23
信息提示
请填处理意见