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墨迹太深木虫 (正式写手)
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小于100bp的DNA双酶切已有3人参与
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我现在有一个已经合成了包含目的片段的质粒，要把目的片段从质粒（2802bp）上双酶切下来，酶切后跑胶看不到89bp的目的片段，但是能够看出来质粒已经没被线性化了，求分子生物学大神指导~ 下面的图，泳道1是marker，泳道2是没有酶切的质粒，泳道3，4是双酶切后的质粒，看不到目的片段条带  2018-5-13.jpg@biostar2009@飞约疯人院@youlinglyw |
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【答案】应助回帖
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| 从胶上看你的质粒应该是已经切好了，你的质粒大约是3kb。质粒的亮度与3000bp 的亮度基本一致，通常 marker 是100-200ng 一条带，你切出来的片段如果只有89bp 是质粒大小的1/30。照你上样的浓度，你切出来的量大致在10ng 左右，所以你染色看不到band。如果你是想切出来装到另一个质粒里的话，这个办法不好，用于酶切的质粒的量要大，并且胶回收的效率会很低。所有建议用 PCR 方法，高保真扩出来后直接过柱纯化，然后双酶切，再过柱纯化一次后与目的质粒做连接。注意双酶切后不用再费事去跑胶，会浪费巨量的样本。这么小的片段连接效率应该是非常高的。Good luck！ |
7楼2018-05-16 12:46:57
用户晓晓
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2楼2018-05-14 16:30:23
墨迹太深
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3楼2018-05-14 17:15:40
用户晓晓
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:57:50
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:57:50
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质粒比较大，你的目的前段又比较小，maker只要能判断大小即可。目前主要是为了能确定你的98bp的存在，所以建议设置2%的胶，100电压，跑个20到30分钟，中间多看看，同时可以再点一个maker I（100-600bp）。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-05-14 17:26:25
匿名
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5楼2018-05-14 17:50:09
匿名
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6楼2018-05-14 17:50:19
8楼2018-05-16 12:54:13
汐尔于
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