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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 质粒双酶切后条带大小不对
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summuryi

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切后条带大小不对已有8人参与

大家好 我的质粒是7000bp左右 用BamHl和Sall双酶切后产生了1000多bp和5000多bp的条带 但这两个酶中间只有500bp左右的长度 用BanHl单酶切质粒后也产生了两个条带 这个质粒序列上只有一个B和S位点 有没有可能是酶切位点发生突变？准备拿去测序 大家有没有什么建议？谢谢

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1楼2018-02-05 16:45:46
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Korea??

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by peitaokong at 2018-02-06 12:15:32
你买的内切酶，一般会有说明书的，你参考一下，比如NEB的酶，说明的就很清楚了，你可以根据说明书，参照自己实验的实际情况，进行灵活处理。比如buffer的选择，酶的用量，酶切的参考时间，酶切的合适温度等等。...

我用NEB的酶，但是按照它的时间好像且不完全，时间长点好像要好点。NEB酶有个应用APP，里面的信息满全。

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11楼2018-02-06 17:02:59
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-02-27 07:49:17
如果你酶切的时间过长，酶容易产生新活性，就开始乱切了。测序也是一个比较直接的检验手段。
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2楼2018-02-05 17:29:24
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summuryi

新虫 (小有名气)
好的 非常感谢 之前单酶切切了1h是一个条带 之后4h就是两个条带了 我也怀疑时间长了

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3楼2018-02-05 17:43:00
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summuryi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2018-02-05 17:29:24
如果你酶切的时间过长，酶容易产生新活性，就开始乱切了。测序也是一个比较直接的检验手段。

但乱切的话 都切成了5000+2000左右 不同反应管的 所以也有些奇怪
质粒双酶切后条带大小不对



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4楼2018-02-05 17:45:48
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