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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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summuryi

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切后条带大小不对已有8人参与

大家好 我的质粒是7000bp左右 用BamHl和Sall双酶切后产生了1000多bp和5000多bp的条带 但这两个酶中间只有500bp左右的长度 用BanHl单酶切质粒后也产生了两个条带 这个质粒序列上只有一个B和S位点 有没有可能是酶切位点发生突变?准备拿去测序 大家有没有什么建议?谢谢

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peitaokong

银虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-02-27 07:49:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by Korea?? at 2018-02-05 22:57:31
酶切时间太长会发生乱切的操作啊,如何确定酶切时间呢,我总想切彻底,总是切过夜
...

你买的内切酶,一般会有说明书的,你参考一下,比如NEB的酶,说明的就很清楚了,你可以根据说明书,参照自己实验的实际情况,进行灵活处理。比如buffer的选择,酶的用量,酶切的参考时间,酶切的合适温度等等。
10楼2018-02-06 12:15:32
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peitaokong

银虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-02-27 07:49:17
如果你酶切的时间过长,酶容易产生新活性,就开始乱切了。测序也是一个比较直接的检验手段。
2楼2018-02-05 17:29:24
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summuryi

新虫 (小有名气)

好的 非常感谢 之前单酶切切了1h是一个条带 之后4h就是两个条带了 我也怀疑时间长了

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3楼2018-02-05 17:43:00
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summuryi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2018-02-05 17:29:24
如果你酶切的时间过长,酶容易产生新活性,就开始乱切了。测序也是一个比较直接的检验手段。

但乱切的话 都切成了5000+2000左右 不同反应管的 所以也有些奇怪
质粒双酶切后条带大小不对



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4楼2018-02-05 17:45:48
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