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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 质粒双酶切后条带大小不对
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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summuryi

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切后条带大小不对已有8人参与

大家好 我的质粒是7000bp左右 用BamHl和Sall双酶切后产生了1000多bp和5000多bp的条带 但这两个酶中间只有500bp左右的长度 用BanHl单酶切质粒后也产生了两个条带 这个质粒序列上只有一个B和S位点 有没有可能是酶切位点发生突变？准备拿去测序 大家有没有什么建议？谢谢

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1楼2018-02-05 16:45:46
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summuryi

新虫 (小有名气)
好的 非常感谢 之前单酶切切了1h是一个条带 之后4h就是两个条带了 我也怀疑时间长了

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3楼2018-02-05 17:43:00
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summuryi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2018-02-05 17:29:24
如果你酶切的时间过长，酶容易产生新活性，就开始乱切了。测序也是一个比较直接的检验手段。

但乱切的话 都切成了5000+2000左右 不同反应管的 所以也有些奇怪
质粒双酶切后条带大小不对



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4楼2018-02-05 17:45:48
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summuryi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Korea?? at 2018-02-05 22:57:31
酶切时间太长会发生乱切的操作啊，如何确定酶切时间呢，我总想切彻底，总是切过夜
...

应该可以做一个100ul的体系 刚到水浴锅里 过一段时间取出来一些放4度保存 最后一起跑胶

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8楼2018-02-06 12:07:02
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summuryi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-02-06 11:46:44
有无酶切对照吗？...

没有跑 今天加上

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9楼2018-02-06 12:07:24
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