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分类 共搜索到 119 个相关话题(最多显示前5000个) 作者 最后发表
动植物 干货分享|动物活体成像，常见技术问题，56个问答，收藏！
大部分的发表文章通常使用前者用作报告基因，也有一些文章使用两者进行双标记。16.组织切片可以观察到生物发光吗？可以，但荧光酶的体外活性保持时间比较短，约几十...28.仪器的解析度如何？...
 科研顾问_Gu 2024-04-26 06:08
医学 干货分享|动物活体成像，常见技术问题，56个问答，收藏！
大部分的发表文章通常使用前者用作报告基因，也有一些文章使用两者进行双标记。16.组织切片可以观察到生物发光吗？可以，但荧光酶的体外活性保持时间比较短，约几十...28.仪器的解析度如何？...
 基础生物实验外 2024-04-09 01:27
分子生物 目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG
找到的一个基因它的CDS开头不是ATG，是GUG，我想把这段基因CDS通过双酶切连到pet28a载体上，但是我又看到PET28a表达载体有起始密码子ATG和核糖体结合位点，把插入序列就能进行表达，请问我...
 食品考研！ 2023-07-24 12:13
分子生物 pet28a双酶切
实验室暂时只有2000的marker，marker旁边是未酶切的质粒，旁边三条泳道都是双酶切的质粒，大小和未酶切的质粒的超螺旋大小一样正常吗？
 蚝油生菜 2022-07-14 03:15
硕博家园 蛋白纯化求助
最近在做蛋白表达和纯化，载体是pET-28a，选用HindⅢ和BamHⅠ进行双酶切，引物设计时没有加His标签。重组质粒转化也成功了，37℃进行蛋白表达，细胞破碎之后上清和沉淀均进行SDS-page，发现...
 gqc1102 2022-04-19 11:26
分子生物 异源表达抗菌蛋白
通过双酶切，T4酶连的方式，将我的1300多bp的目的片段连上了pet-28a，构建大肠杆菌（BL21）构建重组菌，异源表达大概45kda的抗菌蛋白，然后去跑sds-page发现杂带很少，过镍柱也发现流穿前的...
 473212012 2021-09-08 01:48
生物科学 请教！双酶切一直不成功
TA克隆测序成功的质粒以及PET-28a载体双酶切后连接。TA克隆时连接的载体是全式金的simplecloningvetor。质粒1与pet28a是用HindIII和BamHI（takara的快切酶）。质粒2与pet28a是用NcoI和BamHI...
 墨小诔 2021-01-19 09:54
微生物 关于pet28a双酶切
有用HindIII与EcoRI双酶切pet28a质粒的嘛？我用NEB快切酶，35切2h，跑电泳只能看到一条5000多的条带，不知道能不能切好埃目前做连接老是连接不上，所以考虑是不是载体没切好。
 wangpei2433 2019-02-19 01:36
分子生物 新人发帖求助
HindIII和NdeI双酶切后，载体pET28a（大小5kb）和1kb基因T4连接酶16度过夜连接，跑胶，条带正常，BL21电转，提质粒，大小正常，但就是酶切不开了。什么情况。
 yubert0 2018-10-09 02:28
分子生物 pET28a双酶切后条带不对
将pET28a用NcoI和XhoI双酶切过夜后，在1KB以下有很亮的条带。但是正常条带不是应该3-4KB吗？
 aoda123 2018-10-03 02:04
微生物 求指导同源重组构建表达载体
表达载体pet-28a5368bp回收浓度为37ng/ul双酶切线性化的。三个插入片段平均每个1000bp位于两边的片段与载体两端序列30bp同源，片段与片段之间也是，片段浓度为二十几纳克每微，片段与载体按...
 ZHou93 2018-09-13 08:01
分子生物 pet28a双酶切
我的一个目的片段连载pet28a上，现在想切下来连在别的载体上，但是用NEB的NdeI和HindIII双酶切发现条带很淡，抱着试一试的心态做了酶连，但是不长点，想问一下可否用快切酶酶切回收或者大家...
 暖心calmyz 2018-09-10 02:10
微生物 胶回收效率低，求大神指点
手提的pET28a双酶切线性化后胶回收(酶切除去了不需要的60bp小片段)，酶切时加的100ul质粒，回收胶上条带很齐也比较亮，生工胶回收试剂盒回收，50ul的65度水过柱子，静置20min再离心测浓度...
 ZHou93 2018-09-05 12:02
分子生物 原核表达相关
把目的片段和pET-28a分别双酶切以后纯化，用未酶切的pET28和酶切后的pET28跑电泳，不应该是酶切后的条带在上面么？为什么我跑完电泳是酶切后的条带在下面？
 昵称为昵称 2018-08-27 04:56
微生物 pet28a两个酶切位点NdeI和NcoI间隔60bp.如何知道双酶切“完全的...
双酶切后的pet28a需要连接三个1Kbp的片段
 ZHou93 2018-08-27 03:41
分子生物 5月10日质粒更新，q联系1822235623
kB-TA-Luc报告基因PG5luc非空载酶切位点破坏报告基因M50Super...25b-SBP(NB6)原核pColADuet1原核pTwin1原核pTrcHis2B原核PET28a-EYFP(Citrine)原核pET-28a-IL18原核pET-28a-TNNT2原核pET-28a-...
 werq63 2018-05-10 05:41
硕博家园 关于BL21表达产物没有活性
请教各位大神个问题，最近实验遇到的很着急，我从宏基因组中功能筛到一种酯酶，ORFfinder找到orf之后，p出来双酶切酶连到pET-28a中转化BL21表达，但是一直没有活性，也测序过没有移码突变，...
 nanfang612 2018-05-03 10:00
微生物 重组质粒双酶切鉴定结果分析
质粒PET-28a,五千多bp,目的基因285bp,BamI,HindIII双酶切鉴定结果图如下，250-5000Marker。自上而下分别为500030002500200015001000750500250。点的都是重组质粒。不懂为什么会有多的条带...
 Leu66 2018-04-03 08:45
硕博家园 目的片段和pet28连接转化至BL21一直不出结果求助
随后将这三个质粒和pet28(a)做了双酶切,并胶回收。想要将目的片段和pet28(a)连接并转化至BL21，这次用了卡那，平板依旧涂了IPTG和X-gal做蓝白斑筛选，但是平板长出来一直是蓝斑。目的片段和...
 Cuic_Qing 2018-03-06 10:09
分子生物 2月22日质粒更新 交换至少交换5个(联系交换站内信)
1(addgene36035)报告基因pNF-kB-TA-LucPG5luc非空载酶切位点...17b大肠表达质粒pET-20b大肠表达质粒pET-21a（插入片段乙肝病毒序列）大肠表达质粒pET-22b大肠表达质粒pET-28a大肠表达质粒pET-...
 werq63 2018-02-22 03:08
生物科学 基因片段连接pET28
求助我用T4连接酶连接1.7kb的片段（30ng/μL）和pET28a（27ng/μL），亚克隆片段取1μg双酶切（EcoR1和Xho1,EcoR1和Sal1，换了两对引物）3-4小时后胶回收，载体双酶切过夜后胶回收，连接16...
 15700352310 2018-01-09 01:29
分子生物 质粒列表 12月18日更新
TOTO上添加酶切位点...22b大肠表达质粒pET-28a大肠表达质粒pET-28b大肠表达质粒pET-30a大肠表达质粒pET-32a大肠表达质粒pET-32c大肠表达质粒pET39b大肠表达质粒pET-42a大肠表达质粒pET-52b-...
 werq63 2017-12-18 04:35
分子生物 质粒10月26号更新
pCDA3.3(pCDA3.3-TOTO上添加酶切位点)哺乳表达质粒pCDA3-5'...大肠表达质粒pET-21a（插入片段乙肝病毒序列）大肠表达质粒pET-22b大肠表达质粒pET-28a大肠表达质粒pET-28b大肠表达质粒...
 werq63 2017-10-26 06:24
分子生物 PET-28a介绍，继续
在pET-28a载体中，可以通过不同酶切位点的选择，达到N、C双端标签、仅N端标签、仅C端标签及无标签等集中标记形式。His标签有很多优点，一是能构成表位利于纯化和检测，如表达带有His标签的...
 xuyuzhi 2017-10-15 12:59
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