| 查看: 2770 | 回复: 4 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 墨小诔 的 1 个金币 | |||
[交流]
请教！双酶切一直不成功
|
|||
|
想做原核表达。TA克隆测序成功的质粒以及PET-28a载体双酶切后连接。TA克隆时连接的载体是全式金的simple cloning vetor。 质粒1与pet28a是用HindIII和BamHI（takara的快切酶）。质粒2与pet28a是用NcoI和BamHI（takara的快切酶）。采用的先30度3小时切BamHI，然后37度3小时切HindIII（质粒2相同条件）。用的50的体系，两种酶各1，green buffer5，质粒3。 酶切后电泳图如下，质粒1，2长度约2000bp,泳道1为5000marker,后几个孔分别为质粒1，载体，质粒2，载体。 想问的问题: 1.酶切后直接电泳？看到有朋友先高温失活再电泳。 2.酶切不成功，但是条带怎么这样？求解 3.如何正确酶切？  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂
已经有15人回复
-
深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向）
已经有6人回复
-
290求调剂
已经有5人回复
-
一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业
已经有3人回复
-
0857环境调剂
已经有5人回复
-
一志愿浙江大学0856材料与化工求调剂
已经有4人回复
-
081200计算机科学与技术数一英一306求调剂
已经有3人回复
-
材料工程330分求调剂，一志愿985
已经有4人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
材料371求调剂
已经有9人回复
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7575.7
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1386.9小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
|
(1) 无论是高温失活后再电泳还是直接电泳应该都不碍事 (2) pet28a是不是切出来了这个图看不出来，因为切出来的短片段太小了，所以理论上只能看到一个相当于pet28a载体长度的线性片段 (3) 检查一下双酶切buffer是不是合适，同时用两个酶切的话buffer按这个表格走：https://www.takarabio.com/us/pro ... e_digestion_buffers |
2楼2021-01-20 17:18:53
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17129.7
- 散金: 1654
- 红花: 120
- 沙发: 41
- 帖子: 14515
- 在线: 2182.1小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
3楼2021-01-22 12:19:28
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2021-01-22 13:12:22
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
5楼2021-01-22 13:13:02
