| 查看: 1529 | 回复: 2 | ||
[求助]
关于RNA IP 试验中洗脱蛋白的问题 已有1人参与
|
|
最近一直很困惑，希望各位大牛指引 用生物素标记的RNA probe 做IP，用Promega的磁珠调取复合体，之后想要检测蛋白（直接western blot 或者 跑胶染色），蛋白应该怎么洗脱？？？ 1、 有文章写到用biotin elution buffer洗脱 (12.5 mM biotin [Invitrogen], 7.5 mM HEPES [pH 7.5], 75 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.15% SDS, 0.075% sarkosyl, and 0.02% Na-Deoxycholate)，之后用TCA进行纯化，但是我从生工买的 biotin很难溶解，invitrogen的又太贵，有没有好的建议？ 2、考虑到前面要洗脱又要纯化等步骤，损失大，因为我只是要检测用，应该不需要蛋白活性，所以在想能不能直接用SDS-PAGE loading buffer 加到磁珠中直接洗脱蛋白，然后煮沸后上样？？？？ 在第二个问题上纠结很久了，自己有尝试做过，如果SDS-PAGE loading buffer 加到磁珠一起煮沸会有很多很亮的非特异带，不知道各位坛友大牛们有没有好的建议和见解？ |
回复此楼» 猜你喜欢
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
zlq5192021
新虫 (初入文坛)
|
顶一下 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2016-02-26 11:44:55
3楼2016-02-26 14:27:11