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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR末端加A原理？
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风雨断肠人aa

银虫 (小有名气)

[交流] PCR末端加A原理？

用普通的Taq酶PCR时在3‘末端都会多加一个A，请问这是为什么？请大家讲原理，有参考文献更好。
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1楼 2016-02-24 10:44:45
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匿名
本帖仅楼主可见
2楼2016-02-24 10:56:16
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
末端转移酶活性
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3楼2016-02-24 10:58:51
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风雨断肠人aa

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-02-24 10:58:51
末端转移酶活性

请问为什么末端转移酶在这里只加A不加其它碱基呢？
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4楼2016-02-24 11:04:35
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stl409
5楼2016-02-24 11:09:37
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lifechuteng

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风雨断肠人aa: 金币+5, 谢谢！ 2016-02-24 16:38:30
风雨断肠人aa: 金币+5 2016-02-29 09:32:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风雨断肠人aa at 2016-02-24 11:04:35
请问为什么末端转移酶在这里只加A不加其它碱基呢？...

貌似是添加A的效率最高。也可以加别的碱基的，比如在仅添加dTTP时，可以用于T载体的制备。
不过在ATCG碱基都存在时是加A的，具体原因我也不知道。
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6楼2016-02-24 12:49:10
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songjie851

新虫 (初入文坛)
关注，同问

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-02-24 23:56:02
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
关注，同问！

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从事分生的药学生
8楼2016-02-25 00:29:12
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yanyanyuyu

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-02-26 22:39:56
风雨断肠人aa: 金币+5 2016-02-27 18:45:44
因为PCR用的DNA聚合酶无5 ' 到 3 ‘外切酶的活性,校对功能较差,而具备在dNTP过量时,在产物末端添加A,故PCR产物末端有A,若扩增PCR产物较长,需要高准确率时,采用高保真酶,末端不加A，而高保真酶扩增产物要连TA克隆时,可加入Taq酶,在产物末端加A，因为一般PCR采用的是Taq酶扩增,产物末端都有A。
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9楼2016-02-26 15:51:26
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风雨断肠人aa

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yanyanyuyu at 2016-02-26 15:51:26
因为PCR用的DNA聚合酶无5 ' 到 3 ‘外切酶的活性,校对功能较差,而具备在dNTP过量时,在产物末端添加A,故PCR产物末端有A,若扩增PCR产物较长,需要高准确率时,采用高保真酶,末端不加A，而高保真酶扩增产物要连TA克隆时, ...

我的问题是为什么末端加A不加其它的碱基；还是所有的碱基都能加，概率都一样；亦或者所有的都加，但更偏向于添加A
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10楼2016-02-26 21:48:02
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