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风雨断肠人aa

银虫 (小有名气)

[交流] PCR末端加A原理?

用普通的Taq酶PCR时在3‘末端都会多加一个A,请问这是为什么?请大家讲原理,有参考文献更好。
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yanyanyuyu

新虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-02-26 22:39:56
风雨断肠人aa: 金币+5 2016-02-27 18:45:44
因为PCR用的DNA聚合酶无5 ' 到 3 ‘外切酶的活性,校对功能较差,而具备在dNTP过量时,在产物末端添加A,故PCR产物末端有A,若扩增PCR产物较长,需要高准确率时,采用高保真酶,末端不加A,而高保真酶扩增产物要连TA克隆时,可加入Taq酶,在产物末端加A,因为一般PCR采用的是Taq酶扩增,产物末端都有A。
9楼2016-02-26 15:51:26
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风雨断肠人aa

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-02-24 10:58:51
末端转移酶活性

请问为什么末端转移酶在这里只加A不加其它碱基呢?
4楼2016-02-24 11:04:35
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

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风雨断肠人aa: 金币+5, 谢谢! 2016-02-24 16:38:30
风雨断肠人aa: 金币+5 2016-02-29 09:32:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风雨断肠人aa at 2016-02-24 11:04:35
请问为什么末端转移酶在这里只加A不加其它碱基呢?...

貌似是添加A的效率最高。也可以加别的碱基的,比如在仅添加dTTP时,可以用于T载体的制备。
不过在ATCG碱基都存在时是加A的,具体原因我也不知道。
6楼2016-02-24 12:49:10
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songjie851

新虫 (初入文坛)

7楼2016-02-24 23:56:02
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