24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1715  |  回复: 11
当前主题已经存档。

中原小哥

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光问题

做荧光分析时,为确定荧光最大激发波长和发射波长,是不是常先把发射波长设定为0,然后扫描激发波长,得到若干激发峰,然后再依次用得到的不同激发峰的波长为激发光,扫描发射波长,得到那个不随激发光波长而变化的发射峰为最大发射波长,然后依此最大发射峰确定,扫描激发光谱,得到最大激发光?如果如上,为什么一开始要把发射波长设为0呢?请指教,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lulinsmann

木虫 (著名写手)

三无小小鸟

★ ★ ★
wingcat(金币+3,VIP+0):谢谢
lz搞错了,把发射波长设定为0是不可能获得激发谱(即你所说的扫描激发波长)的。
首先确定一下定义:PL谱和PLE谱
PL谱,即光致发光谱,是选定一个激发波长,然后记录在该激发波长下,荧光强度随波长的变化(即lz所说的扫描发射波长,此时的横坐标是发射波长)
PLE谱,即光致发光激发谱,是将你要探测的波长选定,然后改变激发波长,记录在不同激发波长下,所探测波长的荧光强度变化(此时的横坐标是激发波长)
所以,偶认为正确的测试荧光光谱的顺序是:
1)选定一个激发波长(通常选择常用的激发波长——从同行文献中找到,如果实在不知道,我建议先选取较短的波长——光子能量更高,样品受激发的可能性更大),获得一张PL谱,此时可以看到发光峰,获得其波长;
2)选定该发光峰波长,做PLE谱,也可能获得一个峰,或如你所说若干峰,获得这些波长;
3)选用PLE中的波长,对样品再次进行测试PL谱
这样,你就达到了目的:确定荧光最大激发波长和发射波长
江湖背影
2楼2008-10-08 21:06:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

dfazx

我们不是那样做的,我们一般是先做一个紫外吸收,大体确定以下激发波长,然后以最大吸收的波长为激发,在荧光仪上扫描,先扫发射,在固定发射波长时再回来扫激发
3楼2008-10-09 11:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lulinsmann

木虫 (著名写手)

三无小小鸟

嗯,楼上所说也是一种办法,但有两点局限性:
1)设备局限:除了荧光分光光度计外,还需要一台紫外-可见分光光度计
2)样品局限:做紫外吸收对于液体样品比较容易实现,而对固体样品的测试则比较麻烦
江湖背影
4楼2008-10-09 15:25:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puyu

铁虫 (初入文坛)

先选一个激发波长测发光峰位还是先固定监测波长找激发波长,我觉得是根据不同的样品而不同的,一般来说对于自己的样品的发光性能了解的不多的话,两种都要尝试一下的。
比如有的物质,发射峰位比较固定,文献容易查的,那么就可以固定监测波长,测激发光谱,可能存在着基质与发光离子之间的传能,所以最有效的激发波长会因为基质的不同而不同。
令一种情况就相反,比如发光离子对环境比较敏感,那么可能需要先定一个激发波长了,这种情况应该比较麻烦,不过反复测都可以找出来的
5楼2008-10-09 22:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangshuang533

银虫 (小有名气)

其实也可以做一下三维荧光。先扫一下缓冲的三维荧光光谱,然后在加入样品扫一下三维,这样两张图对比一下就出来了大致的激发和发射波长了。要想精确还是要像二楼的那样说得先确定激发扫发射,在确定发射扫激发。
木虫上的守望者!
6楼2008-10-13 11:03:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

opq691

荣誉版主 (知名作家)

小木虫酱油店店主

优秀版主

一般照楼上的试几个数据就出来 了
▄︻┳═一*▄︻┳═一*众里寻虫千百度,蓦然回首,虫在酱油坛深处!▄︻┳═一*▄︻┳═一*
7楼2008-10-13 13:49:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

CE-CL

金虫 (小有名气)

我们一般是按照5楼的方法来的

实验室里一般情况下紫外仪器要比荧光仪器更常见
8楼2008-10-13 16:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohutushen3

铜虫 (正式写手)

5楼的请问一下是不是在紫外可见光谱中最大吸收处的波长就可以视为荧光谱中的激发波长,为什么呢
9楼2008-10-14 08:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

中原小哥

新虫 (初入文坛)

一种化合物的荧光激发光谱的形状,理论上应与其吸收光谱的相同,然而由于荧光仪器的特性,比如光源的能量分布,单色器的透射率和检测器的敏感度都随波长而改变,因而这种表观的激发光谱与吸收光谱的形状都有所差异,在化合物的浓度足够小,对不同波长激发光的吸收正比于其吸光系数,且荧光的量子产率与激发波长无关的条件下,校正后的激发光谱在形状上将于吸收光谱相同,激发波长也与吸收波长最接近.而5楼的方法,我觉得是一种近似的寻找,不能拿来就用,而是以此可以找到发射波长,然后回头再寻找条件下准确的的激发波长.
一块探讨,谢谢
10楼2008-10-15 10:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 中原小哥 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程调剂289 +32 yang婷 2026-04-07 33/1650 2026-04-09 10:18 by wp06
[考研] 调剂 +10 月@163.com 2026-04-08 10/500 2026-04-09 08:38 by 5268321
[考研] 328求调剂 +17 lftmya 2026-04-07 18/900 2026-04-09 08:05 by 5268321
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 0703化学 +29 妮妮ninicgb 2026-04-04 32/1600 2026-04-08 22:50 by 猪会飞
[考研] 302分求调剂 +4 凡语祈愿 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:03 by 土木硕士招生
[考研] 277求调剂 +16 倪建设 2026-04-06 16/800 2026-04-08 21:28 by zhouxiaoyu
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:18 by jp9609
[考研] 285求调剂 +15 哦呦呼o 2026-04-04 17/850 2026-04-06 23:02 by chenzhimin
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 材料295 +13 小英11 2026-04-03 14/700 2026-04-04 09:02 by 来看流星雨10
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
信息提示
请填处理意见