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中原小哥

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光问题

做荧光分析时,为确定荧光最大激发波长和发射波长,是不是常先把发射波长设定为0,然后扫描激发波长,得到若干激发峰,然后再依次用得到的不同激发峰的波长为激发光,扫描发射波长,得到那个不随激发光波长而变化的发射峰为最大发射波长,然后依此最大发射峰确定,扫描激发光谱,得到最大激发光?如果如上,为什么一开始要把发射波长设为0呢?请指教,谢谢
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中原小哥

新虫 (初入文坛)

一种化合物的荧光激发光谱的形状,理论上应与其吸收光谱的相同,然而由于荧光仪器的特性,比如光源的能量分布,单色器的透射率和检测器的敏感度都随波长而改变,因而这种表观的激发光谱与吸收光谱的形状都有所差异,在化合物的浓度足够小,对不同波长激发光的吸收正比于其吸光系数,且荧光的量子产率与激发波长无关的条件下,校正后的激发光谱在形状上将于吸收光谱相同,激发波长也与吸收波长最接近.而5楼的方法,我觉得是一种近似的寻找,不能拿来就用,而是以此可以找到发射波长,然后回头再寻找条件下准确的的激发波长.
一块探讨,谢谢
10楼2008-10-15 10:12:30
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lulinsmann

木虫 (著名写手)

三无小小鸟

★ ★ ★
wingcat(金币+3,VIP+0):谢谢
lz搞错了,把发射波长设定为0是不可能获得激发谱(即你所说的扫描激发波长)的。
首先确定一下定义:PL谱和PLE谱
PL谱,即光致发光谱,是选定一个激发波长,然后记录在该激发波长下,荧光强度随波长的变化(即lz所说的扫描发射波长,此时的横坐标是发射波长)
PLE谱,即光致发光激发谱,是将你要探测的波长选定,然后改变激发波长,记录在不同激发波长下,所探测波长的荧光强度变化(此时的横坐标是激发波长)
所以,偶认为正确的测试荧光光谱的顺序是:
1)选定一个激发波长(通常选择常用的激发波长——从同行文献中找到,如果实在不知道,我建议先选取较短的波长——光子能量更高,样品受激发的可能性更大),获得一张PL谱,此时可以看到发光峰,获得其波长;
2)选定该发光峰波长,做PLE谱,也可能获得一个峰,或如你所说若干峰,获得这些波长;
3)选用PLE中的波长,对样品再次进行测试PL谱
这样,你就达到了目的:确定荧光最大激发波长和发射波长
江湖背影
2楼2008-10-08 21:06:39
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dfazx

我们不是那样做的,我们一般是先做一个紫外吸收,大体确定以下激发波长,然后以最大吸收的波长为激发,在荧光仪上扫描,先扫发射,在固定发射波长时再回来扫激发
3楼2008-10-09 11:35:53
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lulinsmann

木虫 (著名写手)

三无小小鸟

嗯,楼上所说也是一种办法,但有两点局限性:
1)设备局限:除了荧光分光光度计外,还需要一台紫外-可见分光光度计
2)样品局限:做紫外吸收对于液体样品比较容易实现,而对固体样品的测试则比较麻烦
江湖背影
4楼2008-10-09 15:25:18
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